Universal SYBR GREEN qPCR Premix (Şîn)
Hejmara pisîkê: HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) çareseriyek pêş-çareseriyê ye ji bo zêdekirina PCR-ya jimareyî ya 2×dema rast ku bi hesasiyet û taybetmendiya bilind ve tête diyar kirin, bi rengê şîn e, û bandora şopandina zêdekirina nimûneyê heye.Parçeya bingehîn Taq DNA polîmeraza destpêkê ya germ a antîpotê bikar tîne da ku bi bandor zêdekirina ne-taybetî ji ber çewisandina primerê di dema amadekirina nimûneyê de asteng bike.Di heman demê de, formula faktorên pêşvebirinê zêde dike da ku karbidestiya zêdekirina reaksiyona PCR baştir bike û zêdekirina genan bi naverokên GC-yê yên cihêreng (30 ~ 70%) wekhev bike, da ku PCR-ya mîqdar bikaribe têkiliyek xêzikî ya baş di jimareyek berfireh de peyda bike. Herêm.Di vê hilberê de Dye Reference Passive ROX ya taybetî heye, ku ji bo piraniya amûrên qPCR-ê tê sepandin.Ne hewce ye ku meriv giraniya ROX-ê li ser amûrên cihêreng rast bike.Ji bo amadekirina pergala reaksiyonê ji bo amplifikasyonê tenê pêdivî ye ku primers û şablonan lê zêde bikin.
Components
Universal Blue qPCR Master Mix
Şertên hilanînê
Hilber bi pakêtên qeşayê ve tê şandin û 18 mehan di -25℃~-15℃ de tê hilanîn.Pêdivî ye ku dema hilanîn an amadekirina pergala reaksiyonê ji tîrêjên ronahiyê yên bihêz dûr bikevin.
Specification
Lisersekinî | 2× |
Metoda Detection | SYBR |
Rêbaza PCR | qPCR |
Polymerase | Taq DNA polymerase |
Cureyê nimûneyê | DNA |
Amûrên serîlêdanê | Piraniya amûrên qPCR |
Cureyê hilberê | SYBR premix ji bo PCR-ya mîqdar a fluoresansê ya rast |
Serlêdan li (serlêdanê) | Gene Expression |
Instructions
1.Sîstema Reaksiyonê
Components | Volome(μL) | Volome(μL) | Koncentrasyona dawî |
Universal SYBR GREEN qPCR Premix | 25 | 10 | 1× |
Destpêka Pêşî (10 μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2 μmol/L |
Reverse Primer (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2 μmol/L |
DNA | X | X | |
ddH2O | heta 50 | heta 20 | - |
[Têbînî]: Berî ku bikar bînin bi tevayî tevlihev bikin da ku ji hejandina tund ji bilbilên zêde dûr nekevin.
a) Kêmbûna primer: Hêza paşîn a paşîn 0,2 μmol / L e, û her weha dikare di navbera 0,1 û 1,0 μmol / L de wekî ku pêdivî ye were sererast kirin.
b) Kêmbûna şablonê: Ger şablon çareseriya stokê ya cDNA-ya neqilandî be, divê qebareya ku tê bikar anîn ji 1/10 ya tevheviya reaksiyona qPCR derbas nebe.
c) Dilbûna şablonê: Tê pêşniyar kirin ku çareseriya stokê ya cDNA 5-10 carî were rijandin.Dema ku nirxa Ct ya ku ji hêla zêdekirinê ve hatî wergirtin 20-30 dewran be, mîqdara çêtirîn ya şablonê ya lê zêdekirî çêtir e.
d) Pergala reaksiyonê: Tê pêşniyar kirin ku 20μL an 50μL bikar bînin da ku bandorkerî û dubarebûna zêdekirina genê armancê piştrast bikin.
e) Amadekirina pergalê: Ji kerema xwe di bencek super paqij de amade bikin û serişte û lûleyên reaksiyonê bêyî bermayiya nukleazê bikar bînin;tê pêşniyar kirin ku şîretan bi kartolên parzûnê re bikar bînin.Ji gemariya xaç û aerosolê dûr bixin.
2.Bernameya reaksiyonê
Bernameya Standard
Pêngava çerxê | Temp. | Dem | Cycles |
Denaturasyona destpêkê | 95℃ | 2 min | 1 |
Denaturasyon | 95℃ | 10 sec | 40 |
Pîvankirin / Extension | 60℃ | 30 çirk★ | |
Qonaxa helandinê | Instrument Defaults | 1 |
Bernameya Zû
Pêngava çerxê | Temp. | Dem | Cycles |
Denaturasyona destpêkê | 95℃ | 30 sec | 1 |
Denaturasyon | 95℃ | 3 sec | 40 |
Pîvankirin / Extension | 60℃ | 20 çirk★ | |
Qonaxa helandinê | Instrument Defaults | 1 |
[Têbînî]: Bernameya bilez ji bo piraniya genan maqûl e, û bernameyên standard dikarin ji bo genên avahiya navîn a tevlihev a kesane werin ceribandin.
a) Germahî û dema lêdanê: Ji kerema xwe li gorî dirêjahiya genê aşîkar û armancê rast bikin.
b) Bidestxistina sînyala floransê (★): Ji kerema xwe prosedûra ceribandinê li gorî daxwazên di rêwerzên karanîna amûrê de bicîh bikin.
c) Kevirê helandinê: Bernameya xwerû ya amûrê dikare bi gelemperî were bikar anîn.
3. Analîz Encam
Ji bo ceribandinên hejmarî herî kêm sê dubareyên biyolojîkî hewce bûn.Piştî reaksiyonê, pêdivî ye ku kêşeya amplification û kelek helandinê were pejirandin.
3.1 Kûreya zêdekirinê:
Kevirê zêdekirina standard bi teşeya S-yê ye.Dema ku nirxa Ct bikeve navbera 20 û 30'î de, analîza mîqdar herî rast e. Ger nirxa Ct ji 10 kêmtir be, pêdivî ye ku şablon were rijandin û ceribandinek dîsa were kirin.Dema ku nirxa Ct di navbera 30-35 de ye, pêdivî ye ku meriv hûrbûna şablonê an qebareya pergala reaksiyonê zêde bike, da ku kargêriya zêdekirinê baştir bike û rastbûna analîza encamê misoger bike.Dema ku nirxa Ct ji 35-ê mezintir be, encamên testê nekarin bi qasê vegotina genê analîz bikin, lê dikarin ji bo analîza kalîteyî werin bikar anîn.
3.2 Kevirê helandinê:
Yekane lûtkeya keviya helandinê destnîşan dike ku taybetmendiya reaksiyonê baş e û dikare analîza hejmarî were kirin;ger kêşa helandinê lûtkeyên ducarî an pirjimar nîşan bide, analîza hejmarî nikare were kirin.Kevirê helandinê lûtkeyên ducarî nîşan dide, û pêdivî ye ku meriv dadbar bike ka lûtkeya ne-armanc dimera pêşîn e an zêdekirina ne-taybetî bi elektroforezkirina gel agarose ya DNA ye.Ger ew dimerek primerê be, tê pêşniyar kirin ku meriv kombûna primerê kêm bike an pêşbirkên ji nû ve dîzaynkirina bi karbidestiya zêdekirina bilind.Ger ew zêdekirinek ne-taybetî ye, ji kerema xwe germahiya lêdanê zêde bikin, an jî pêşbirkan bi taybetî ji nû ve dîzayn bikin.
Têbînî
Ji kerema xwe PPE-ya pêwîst, wek kiras û destikên laboratîfê li xwe bikin, da ku tenduristî û ewlehiya xwe misoger bikin!
Ev hilber TENÊ ji bo karanîna lêkolînê ye!