Rnase A
Ribonukleaz A (RNaseA) polîpeptîdek yek-zincî ye ku 4 bendên dîsulfîdî bi giraniya molekulê ya bi qasî 13,7 kDa vedihewîne.RNase A endoribonukleazek e ku bi taybetî RNA-ya yek-zindî li bermahiyên C û U hilweşîne.Bi taybetî, veqetandin girêdana fosfodîsterê ya ku ji hêla 5'-rîboza nukleotîdê û koma fosfatê ya li ser 3'-rîboza nukleotîdê cîranê pîrîmîdîn ve hatî çêkirin nas dike, ji ber vê yekê fosfatên 2, 3'-Cîklîk bi ya têkildar re hîdrolîz dibin. 'fosfatên nukleozîd (mînak pG-pG-pC-pA-pG ji hêla RNase A ve tê perçe kirin da ku pG-pG-pCp û A-PG çêbike).RNase A di veqetandina ARN-ya yek-zindî de ya herî çalak e.Pîvana xebatê ya pêşniyarkirî 1-100μG / mL e, bi pergalên reaksiyonê yên cihêreng re hevaheng e.Kêmbûna xwê ya kêm (0-100 mM NaCl) dikare were bikar anîn da ku RNA-ya yek-zincî, RNA-ya du-zincî, û zincîrên RNA yên ku ji hêla hîbrîdîzasyona RNA-DNA-yê ve têne çêkirin, were qut kirin.Lêbelê, di hûrbûna xwê ya bilind de (≥0.3 M), RNase A tenê bi taybetî RNA-ya yek-zindî diqetîne.
RNase A herî zêde ji bo rakirina ARNyê di dema amadekirina ADNya plazmîdî an jî DNAya genomîk de tê bikaranîn.Di pêvajoya amadekirinê de DNase çalak be yan nebe, dikare bi hêsanî bandorê li reaksiyonê bike.Rêbaza kevneşopî ya kelandina di serşokê de dikare were bikar anîn da ku çalakiya DNase neçalak bike.Ev hilber DNase û proteazê nahewîne, û berî ku bikar bîne dermankirina germê hewce nake.Wekî din, ev hilber dikare di ceribandinên biyolojiya molekulî de wekî analîza parastina RNase û analîza rêza RNA jî were bikar anîn.
Şertên Storage
Hilber dikare li -25-25-15℃ were hilanîn, ji bo 2 salan derbasdar e.
Instructions
Ev yek ji awayên hevpar e ji bo amadekirina çareseriya hilanînê RNase A.Ew dikare ji hêla jî ve were amadekirinrêbazên din ên li gorî rêbazên kevneşopî yên di laboratuar an wêjeya referansê de (wek mînakrasterast di 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 an jî Tris-NaCl de tê hilweşandin)
1. 10 mM acetate sodyûm (pH 5.2) bikar bînin da ku 10 mg/mL çareseriya hilanînê RNase A amade bikin.
2. Germkirina li 100 ℃ ji bo 15 min
3. Li germahiya odeyê sar bikin, 1/10 volta 1 M Tris-HCl (pH 7,4) lê zêde bikin, pH-ya wê bigihînin 7,4 (ji bomînak, 500 ml 10g/ml çareseriya hilanînê RNase 1M Tris-HCL, PH7.4 lê zêde bike)
4. Ji bo hilanîna cemidî, ku dikare heya 2 salan domdar be, di -20℃ de pakêtkirî ye.
[Têbînî]: Dema ku çareseriya RNaseA di bin şert û mercên bêalî de tê kelandin, barîna RNase dê çêbibe;Ew di pHek kêmtir de biqelînin, û heke barîn hebe, ew dikare were dîtin, ku dibe ku ji ber hebûna nepakiyên proteîn çêbibe.Ger piştî kelandinê gemar were dîtin, nepaqijî dikare bi santrîfujasyona bilez (13000 rpm) were rakirin, û dûv re ji bo hilanîna cemidandinê were pakkirin.
Agahiya hilberê
| Sînonîm | Ribonukleaz I;Ribonukleazê pankreasê;Ribonuclease 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS No. | 9001-99-4 |
| Xuyabûnî | Toza spî ya lyophilized |
| Giraniya molekulî | ~ 13.7kDa (rêzika asîda amînoyî) |
| Nirx Ph | 7.6 (rêjeya çalakiyê 6-10) |
| Germahiya minasib | 60℃ (Rêjeya çalakiyê 15-70℃) |
| Agent aktîfkirin | Na2+.K+ |
| Inhibitor | Rnase Inhibitor |
| Rêbaza neçalakkirinê | Bi germkirinê nayê neçalak kirin, tê pêşniyar kirin ku stûna santrîfujê bikar bînin |
| Reh | Bovine |
| Çareseriya | Di avê de çareser dibe (10 mg/ml) |
| Windakirina li ser hişk | ≤5.0% |
| Çalakiya enzîmê | ≥60 yekîneyên Kunitz/mg |
| Xala îsoelektrîkê | 9.6 |
Têbînî
Ji bo ewlekarî û tenduristiya we, ji kerema xwe ji bo xebatê kincên laboratîf û destikên yekcar li xwe bikin.
