Proteinase K (Avî)
Hejmara pisîkê: HC4502A
Proteinase K proteazek serine stabîl e ku xwedan taybetmendiya substratê ya berfireh e.Ew gelek proteînan di rewşa xwemalî de jî di hebûna deterjantan de hilweşîne.Delîlên ji lêkolînên strukturên krîstal û molekulî destnîşan dikin ku enzîm ji malbata subtilisin e ku bi sêweyek katalîtîk a cîhê çalak e (Asp39-Bûyin69- Ser224).Cihê serdest ê veqetandinê girêdana peptîdê ye ku li tenişta koma karboksîl a asîdên amînî yên alifatîk û aromatîk ên bi komên alfa-amino yên blokekirî re ye.Bi gelemperî ji bo berfirehiya xwe tê bikar anîntaybetmendî.
Specification
| Xuyabûnî | Şîrkek bêreng ber qehweyî ya sivik |
| Çalakî | ≥800 U/ml |
| Giraniya proteîn | ≥20 mg/ml |
| DNase | Yek nehat dîtin |
| RNase | Yek nehat dîtin |
Şertên Storage
Li germahiya 2-8 ℃ hilînin.
Taybetmendiyên
| hejmara EC | 3.4.21.64 (Recombinant ji albûma Tritirachium) |
| Giraniya molekulî | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| Xala îsoelektrîkê | 7.81 |
| PH optimum | 7.0-12.0 Fig.1 |
| Germahiya optimum | 65 ℃ Fig.2 |
| aramiya pH | pH 4,5-12,5 (25℃, 16 h) Fig.3 |
| îstîqrara termal | Li jêr 50℃ (pH 8.0, 30 min.) Fig.4 |
| Activators | SDS, urea |
| Inhibitors | Diisopropyl fluorophosphate;fenîlmethylsulfonyl fluoride |
Applications
1. Kîta teşhîsa genetîkî
2. Kîtên derxistina RNA û DNA
3. Derxistina hêmanên ne-proteîn ji destan, hilweşandina nepakiyên proteîn, wek vakslêdanên DNA û amadekirina heparin
4. Amadekirina ADNya kromozomê bi elektroforezên pêlsî
5. blota rojavayî
6. Reagentên albûmîn ên glycosylated enzîmatîk di teşhîsa vitro de
Tewdîr
Dema ku hûn bikar tînin an jî giran dikin destikên parastinê û gogan li xwe bikin, û piştî bikar anînê baş bi hewa vekin.Dibe ku ev hilber bibe sedema reaksiyonên alerjîk ên çerm û aciziyek cidî ya çavan.Ger bêhin kirin, dibe ku bibe sedema alerjî an nîşanên astimê an jî dyspnea.Dibe ku bibe sedema acizbûna nefesê.
Assay
Unit pênase
Yek yekîneyek (U) wekî mîqdara enzîma ku ji bo hîdrolîzkirina kazeînê hewce dike ku di bin şert û mercên jêrîn de di hûrdemê de 1 μmol tyrosine hilberîne tê pênase kirin.
Amadekirina reagents
Reagent I: 1 g kazeîna şîr di 50 ml çareseriya 0.1M sodyum fosfatê (pH 8.0) de hate hilweşandin, di 65-70 ℃ avê de ji bo 15 hûrdeman hate înkubakirin, hate helandin û hilweşandin, bi avê sar kirin, ji hêla hîdroksîdê sodyûm ve heya pH8.0 hate sererast kirin. volume 100ml.
Reagent II: Çareseriya TCA: 0.1M trichloroacetic acid, 0.2M sodyum acetate, 0.3M acetic acid.
Reagent III: 0,4M Na2CO3çare.
Reagent IV: Reagenta Forint 5 caran bi ava paqij tê rijandin.
Reagent V: Diluentê enzîmê: 0.1M çareseriya fosfatê sodyûm (pH 8.0).
Reagent VI: Çareseriya tîrosîn: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml tîrosîn bi 0,2M HCl ve hatiye helandin.
Doz
1. 0,5 ml ji reagent I-yê berî 37℃ tê germ kirin, 0,5 ml çareseriya enzîmê lê zêde bike, baş tevlihev bike, û li 37℃ ji bo 10 deqîqeyan bikeve.
2. Ji bo ku reaksiyonê rawestîne 1 ml reagent II lê zêde bikin, baş tevlihev bikin û 30 hûrdeman inkubasyonê bidomînin.
3. Çareseriya reaksiyonê ya centrifugate.
4. 0.5 ml supernatant bigirin, 2.5 ml reagent III, 0.5 ml reagent IV lê zêde bikin, baş tevlihev bikin û li 37℃ ji bo 30 hûrdeman bixin.
5. OD660wekî OD hate diyarkirin1;Koma kontrolê ya vala: 0.5 ml reagent V tê bikaranîn ku li şûna çareseriya enzîmê ji bo destnîşankirina OD660wek OD2, ΔOD=OD1-OD2.
6. Kûçika standard L-tîrosîn: 0.5mL çareseriya L-tîrosîn giraniya cûda, 2.5mL Reagent III, 0.5mL Reagent IV di lûleya santrîfujê ya 5mL de, di 37℃ de ji bo 30 hûrdeman inkubat bikin, ji bo OD vedîtin.660ji bo tansiyona L-tîrosîn a cihêreng, dûv re qertafa standard Y=kX+b tê bidestxistin, li wir Y giraniya L-tîrosîn e, X OD e.600.
Hesabkirînî
2: Hêjmara tevahî ya çareseriya reaksiyonê (mL)
0.5: Hêjmara çareseriya enzîmê (mL)
0.5: Hêjmara şilavê ya reaksiyonê ku di destnîşankirina kromojenîk de tê bikar anîn (mL)
10: Dema reaksiyonê (min)
Df: Dilbûna piralî
C: Giraniya enzîmê (mg/mL)
Çavkanî
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Biophys.Res.Commun.(1971);44:513.
3. Hîlz, H.et al.,Eur.J. Biochem.(1975);56:103-108.
4. Sambrook Jet al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor (1989).
Figures
Keman. 1 Optimum pH
100mM çareseriya tampon: pH6.0-8.0, Na-fosfat;pH8.0- 9.0, Tris-HCl;pH9,0-12,5, Glycine-NaOH.Kanbûna enzîmê:1mg/ml
Hêjîrê 2 Germahiya optimum
Reaksiyonê di 20mM tampon K-fosfatê de pH 8.0.Giraniya enzîmê: 1 mg/ml
Fig. 3 pH Nehejî
25℃,16 h-dermankirina bi 50mM çareseriya tampon: pH 4.5-5.5, Acetate;pH 6,0-8,0, Na-fosfat;pH 8,0-9,0, Tris-HCl.pH 9,0-12,5, Glycine-NaOH.Giraniya enzîmê: 1 mg/ml
Hêjîrê 4 Termal nehejî
30 hûrdem-dermankirina bi 50mM Tris-HCl tampon, pH 8.0.Giraniya enzîmê: 1 mg/ml
jimar 5 Storage stability at 25℃
