Germahiya hestiyar UNG
Germahiya Sensitive UNG (TS-UNG) di E. coli de bi vegotina rekombînant tê bidestxistin.Enzîm serbestberdana uracila belaş ji ADNya yek û du-zindî ya uracil heye katalîze dike û li hember ARNyê neçalak e.Li gorî enzîma UNG ya kevneşopî ya bi eslê genê E. coli, enzîma TS-UNG di germahiyên nizm (20℃~37℃) de xwedan çalakiyek bilindtir e û bi germahiyê hestiyar e û bi hêsanî bêçalak dibe (50℃), ji hilweşandina zêdekirina dUTP-ê dûr dikeve. hilberên li germahiya odeyê ji hêla çalakiya bermayî ya ku dibe ku piştî neçalakkirina enzîma UNG ya kevneşopî bimîne.Ji ber vê yekê, enzîma TS-UNG ne tenê ji bo reaksiyona pêşîlêgirtina qirêjiya PCR-ê maqûl e, lê di heman demê de bi bernameya zêdekirina RT-PCR-ê re jî baş tê hevûdu û dikare di reaksiyona pêşîlêgirtina qirêjiya RT-PCR de were bikar anîn.
Serlêdana Pêşniyar kirin
Pêşîlêgirtina Contamination Amplification
Rewşa Storage
-20°C ji bo depokirina demdirêj, divê berî ku were bikar anîn baş were tevlihev kirin, ji cemidandin-germbûna pir caran dûr bisekinin.
Storage tampon
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilîzator, %50 Glîserol.
Unit Definition
Mîqdara enzîma ku ji bo hilweşandina 1 μg ADN-ya yek-zindî ya ku bazên dU di 1 saetê de di 37°C de hewce dike, 1 yekîneya çalakiyê (U) ye.
Kontrola Kalîteyê
1.SDS-PAGE paqijiya elektroforetîkî ji% 98 mezintir
2.Çalakiya hilweşandinê, kontrolkirina hevseng, aramî
3.Çalakiya nukleazê ya biyanî tune, endonukleazek exogenous an gemariya exonuclease tune.
Instructions
| Components | Volume (μL) | Teqandina dawî |
| 10 × PCR Tampon (dNTP belaş, Mg²+belaş) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (li şûna dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5U) |
| 25 × Têkelkirina Primeryek | 2 | 1× |
| Şablon | - | ＜1 μg/reaksiyon |
| ddH2O | Heta 50 | - |
Nîşe: a: Ger ji bo qPCR/qRT-PCR were bikar anîn, divê sondaya fluorescentê li pergala reaksiyonê were zêdekirin.Bi gelemperî, giraniya yekem a paşîn a 0.2 μM dikare encamên baş bide;dema ku performansa reaksiyonê xizan be, hûrbûna primer dikare di navbera 0,2-1 μM de were sererast kirin.Bi gelemperî, hûrbûna sondajê di navbera 0.1-0.3 μM de xweşbîn e.Ezmûnên gradientê yên konsantasyonê dikarin bêne kirin da ku hevrêziya çêtirîn a primer û sondajê bibînin.
Têbînî
1.Germahiya reaksiyonê ya herî baş a enzîma TS-UNG bi nisbeten kêm e, û ew dikare di navbêna 20℃~37℃ de were xweşbîn kirin, dosyaya enzîmê û dema reaksiyonê dikare di rêza 0.1~0.5 U, 5~ de were xweş kirin. 10 min;û enzîm dikare di pêvajoya veguherîna berevajî de bêçalak bibe.
2.Ew ji bo PCR û RT-PCR-ê ji bo pêşîlêgirtina qirêjiyê maqûl e.
3.Pir caran ji cemidan-germbûnê dûr bikevin, û li ber guheztinên mezin ên germahiyê nehêlin.
4.Genên cihêreng ên ku werin zêdekirin xwedan karbidestiya karanîna cûda ya dUTP û hestiyariya enzîma UNG-ê ne, ji ber vê yekê, heke karanîna pergala UNG bibe sedema kêmbûna hesasiya tespîtê, divê pergala reaksiyonê were sererast kirin û xweşbîn kirin, ger hewcedariya we bi piştgiriya teknîkî hebe, ji kerema xwe têkilî daynin. şîrketa me.
