Superstart qPCR Premix plus-UNG
Hejmara pisîkê: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG reagentek pispor e ku ji bo reaksiyonên kalîteyî û mîqdar ên PCR-ya Real Time-ê bi karanîna vedîtina bingeha sondajê hatî çêkirin, ku bi taybetî ji bo pêvajoyên lyophilîzasyonê hatî pêşve xistin.Ew dihewîne enzîma germ-destpêk a nû Hotstart Taq plus (DG), ku çalakiya wê ya enzîma Taq di germahiya odeyê de hatî mohrkirin, bi bandor zêdekirina ne-taybetî ya ku ji ber vejandina ne-taybetî ya primer an avakirina dimera primer di bin şert û mercên germahiya nizm de çêdibe, asteng dike, bi vî rengî çêtir dike. taybetmendiya reaksiyona amplification.Ev reagent tamponek taybetî ya qPCR-ya xweşbînkirî û pergala dij-tevlîhevbûnê ya UNG/dUTP bikar tîne da ku dest bi germbûna bilez bi dest bixe, ku karûbar û hesasiyeta reaksiyonên qPCR pir baştir dike.Ew dikare di cûrbecûr deverên jimartinê de kelûpelên standard ên baş bi dest bixe û bi rast hejmartinê pêk bîne, bi bandor pêşî li zêdekirina erênî ya derewîn a ku ji ber hilberên PCR-ya mayî an gemariya aerosolê ve hatî çêkirin, bigire.Ev reagent bi piraniya amûrên PCR-ya mîqdar ên fluorescent ên ji hilberînerên wekî Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad û Roche hwd re hevaheng e, û di forma lyophilized de îstîqrara baş nîşan dide.
pêkhatina reagent
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+belaş) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4× lyoprotecant (vebijarkî)
Şertên Storage
Hilberîna demdirêj li -20℃;dikare heta 3 mehan li 4 ℃ were hilanîn.Berî ku bikar bînin baş tevlihev bikin ûji cemidandin û şilbûna dubare dûr bixin.
Protokola Bisîkletê
| Doz | Temp. | Dem | Zîvirok |
| Hezm | 50℃ | 2 min | 1 |
| Çalakkirina Polymerase | 95℃ | 1~5 min | 1 |
| Denature | 95℃ | 10~20 s | 40-50 |
| Annealing û Extension | 56~64℃ | 20-60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction System Amadekirin
|
Composition |
Volume 25µL |
50µL Volume |
Koncentrasyona dawî |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+belaş) (DG) | 5 μL | 10 μL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0,45 μL | 0.9 μL | 4,5 mM |
| 4× lyoprotecant1 | 6,25 μL | 12,5 μL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2 μL | 1× |
| Şablon DNA3 | —- | —- | —- |
| ddH2O | Heta 25 μL | Heta 50 μL | —- |
1. Ji bo destpêkek 0.2μM ya dawîn bi gelemperî encamên baş dide;dema ku performansa reaksiyonê nebaş be, li gorî hewcedariyê di navbera 0.2-1μM de berhevoka primer eyar bikin.Kêmbûna sondajê bi gelemperî di nav rêza 0.1-0.3μM de bi ceribandinên gradientê ve tête xweşbîn kirin da ku berhevokên çêtirîn bibînin.
2. Hejmara kopî ya genên armanc ên ku di celebên şablonan de hene diguhere;heke hewce be, rijandina gradient dikare were kirin da ku mîqdara zêdekirina şablonê ya çêtirîn were destnîşankirin.
3. Ev sîstem dikare lyophilized;dema ku xerîdar vê pergalê bêyî hewcedariyên cemidî-zuwakirinê bikar tînin, 4×lyoprotecant dikare bi bijartî were zêdekirin; heke hilberên qeşa-ziwa hewce ne, di dema erêkirina performansa hilberê ya qonaxa reagentên şil de, divê ew 4×lyoprotecant zêde bike da ku bi pêkhateyên pergala lyophilized re hevrêziyê bike. û bandorên.
Dema ku sîstem tê bikaranînd ji bo zuhakirina cemidî, amade bikin sîstem as pêketînî:
| Composition | 25µL Pergala Reaksiyonê |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+belaş) (DG) | 5 μL |
| 250mM MgCl2 | 0,45 μL |
| 4× lyoprotecant | 6,25 μL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | Heta 18-20 μL |
* Ger pergalên din ên ji bo zuwakirina cemidî hewce ne, ji kerema xwe cuda şêwir bikin.
Pêvajoya Lyophilizationss
| Doz | Temp. | Dem | Rewş | Çap |
| Berî cemidandinê | 4℃ | 30 min | Rawestan |
1 atm |
| -50℃ | 60 min | Cooling | ||
| -50℃ | 180 min | Rawestan | ||
| Ziwakirina Seretayî | -30℃ | 60 min | Sofac |
Vacuum Ultimate |
| -30℃ | 70 min | Rawestan | ||
| Drying Duyemîn | 25℃ | 60 min | Sofac |
Vacuum Ultimate |
| 25℃ | 300 min | Rawestan |
2. Pêvajoya lyophilîzasyona jorîn tenê ji bo referansê ye.Cûreyên hilberên cûda û zuwakerên cûda yên cemidî xwedan parametreyên cihêreng in, ji ber vê yekê verastkirin dikarin li gorî rastîn werin çêkirin.şert û mercên di dema bikaranîna.
3. Dibe ku pêvajoyên lîophilîzasyonê yên cihêreng ji bo pîvanên cûda yên lîofîlîzasyonê maqûl binhilberan, ji ber vê yekê dema ku ji bo hilberîna mezin tê bikar anîn divê erêkirina ceribandina têr were kirin.
Talîmatên ji bo bikaranîna lyophilized toz
1. Bi kurtî santrîfujê toza lyophilized;
2. Şablonê asîda nukleîk bi toza lyophilized zêde bikin û heya 25µL avê lê zêde bikin;
3. Mix baş bi santrîfugasyon û bi bez li ser makîne.
Kontrola Kalîteyê:
1. Testkirina fonksiyonê: hestiyar, taybetmendî, dubarekirina qPCR.
2. No aktîvîtîya nucleazê eksogenous, bê endo/exonuclease gemarî.
Agahiyên Teknîkî:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG enzîmek nû ya germ-destpêk bikar tîne ku di nav 1~5 hûrdeman de destpêkirina germî ya bilez dihêle;bi navgîniya formulasyona tamponek taybetî, ew ji bo reaksiyonên PCR-ya mîqdar ên piralî yên fluorescentî minasib e.
2. Ew xwedan taybetmendiya bilindtir e ku bi girîngî hesasiyeta vedîtina sînorê PCR-ya mîqdar a fluorescence çêtir dike, normalîzekirina kelûpelên amplifikasyonê dike, nirxa floransê di şablonên giraniya nizm de çêtirbûnek eşkere distîne, ku wekî reagentên tespîtkirina mîqdar ên PCR-ya fluoresansê bi hesasiyeta bilind.
3. Ji bo prîmerên bi germahiya pijandinê kêmtir an ji perçeyên 200 bp dirêjtir, rêbaza 3-gavekî tê pêşniyar kirin.
4. Karbidestiya karanîna dUTP û hestiyariya ji enzîma UNG re ji bo genên armanc ên cihêreng cûda dibe, ji ber vê yekê heke karanîna pergala UNG bibe sedema kêmbûna hestiyariya tespîtê, divê pergala reaksiyonê were sererast kirin û xweşbîn kirin.Ger piştgiriya teknîkî hewce ye ji kerema xwe bi pargîdaniya me re têkilî daynin.
5. Dever û pîpetên veqetandî berî û piştî zêdekirinê bikar bînin, di dema xebatê de destmalan li xwe bikin û pir caran wan biguhezînin;piştî qedandina PCR lûleya reaksiyonê venekin da ku pîsbûna nimûneyan bi hilberên PCR kêm bikin.
