Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (guherandina dij laş) ADN-ya polîmeraza germ-destpêk a germ e ji Thermus aquaticus YT-1, ku xwedan çalakiyek polîmerazê 5'→3' û çalakiyek endonukleazê ya 5' ye.Taq DNA polîmeraza germ-destpêk a Taq DNA-ya polîmeraz e ku ji hêla antîbodên Taq-ê veguhezbar ve tê guheztin.Guhertina antîpoş taybetmendî, hestiyar û hilberîna PCR zêde kir.
Components
| Perçe | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4×1 ml | 4×10 ml | 4×50 ml | 5×400 mL |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (Antîbody hate guherandin) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10×5 ml |
Applications
10 mM Tris-HCl (pH 7,4 li 25℃), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0,5% Tween20, 0,5% IGEPALCA-630 û 50% Glycerol.
Rewşa Storage
Veguheztin di bin 0°C de û di -25°C~-15°C de were hilanîn.
Unit Definition
Yekîneyek wekî mîqdara enzîma ku 15 nmol dNTP di nav 30 hûrdeman de di 75°C de di nav maddeya ku di asîdê de nayê çareser kirin vedihewîne tê pênase kirin.
Kontrola Kalîteyê
1.Endonuclease Çalakî:Inkubasyona 20 U ya enzîmê bi 4 μg DNA pUC19 ji bo 4 demjimêran li 37 ℃, wekî ku ji hêla elektroforeziya gel ve hatî destnîşan kirin, nehişt ku ADN-ê hilweşîne.
2.5 kb Lambda PCR:25 çerxên zêdekirina PCR ya 5 ng Lambda DNA bi 1,25 yekîneyên Taq DNA Polymerase di hebûna 200 μM dNTP û 0,2 μM primers de di hilberîna 5 kb ya hêvîdar de encam dide.
3.Çalakiya Exonuclease:Inkubasyona reaksiyonek 50 μl ya ku herî kêm 12,5 U Taq DNA Polymerase bi 10 nmol 5´-FAM oligonukleotide heye ji bo 30 hûrdeman di 37℃ de degradasyonek nayê dîtin dernakeve.
4.Çalakiya RNase:Inkubakirina reaksiyona 10 μL ya ku 20 U enzîm tê de bi 1 μg transkrîptên RNA-yê ji bo 2 demjimêran li 37°C, nehişt ku RNA-yê ku bi elektroforeziya gêlê ve hatî destnîşan kirin hilweşîne.
5.Neçalakkirina germê:Na.
Pergala Reaksiyonê
| Components | Bend |
| Şablon DNAa | bixwe |
| 10 μM Pêşî Primer | 0,5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0,5 μL |
| dNTP Mix (her 10mM) | 0,5 μL |
| 5×HC Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseb(5U/μL) | 0,125 μL |
| Ava bê nukleaz | Heta 25 μL |
Têbînî:
1) a.
| DNA | Biha |
| Genomîk | 1 ng-1 μg |
| Plasmid an Viral | 1 pg-1 ng |
2) b.Di sepanên pispor de giraniya herî baş a Taq DNA Polymerase dikare ji 5-50 yekîneyên/mL (0,1-0,5 yekîne/25 μL reaksiyonê) be.
Protokola bisiklêdana termal
PCR
| Gav | Germî(°C) | Dem | Cycles |
| Denaturasyona destpêkêa | 95 ℃ | 1-3 min | - |
| Denaturasyon | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Cycles |
| Annealingb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Dirêjkirinî | 68 ℃ | 1kb/min | |
| Berfirehkirina Dawî | 68 ℃ | 5 min | - |
Têbînî:
1) Denaturasyonek destpêkê ya 1 hûrdeman di 95 ° C de ji bo pir zêdekirinan bes e.Ji bo şablonên dijwar, denaturasyonek dirêjtir 2-3 deqîqeyan li 95°C tê pêşniyar kirin.Bi kolonî PCR, denaturasyonek destpêkê ya 5 deqîqeyan li 95°C tê pêşniyar kirin.
2) Pêvajoya lêdanê bi gelemperî 15-60 s.Germahiya lêdanê li ser bingeha Tm ya cotê pêşîn e û bi gelemperî 45-68 ℃ ye.
