Multiplex Yek Step RT-qPCR Premix-UNG
Hejmara pisîkê: HCB5145A
Kitek Probe ya Multiplex One Step RT-qPCR (UDG Plus) kîtek PCR-ya mîqdar a multiplex e ku li ser bingeha RNA-yê wekî şablonê ye.Di pêvajoya ceribandinê de, veguheztina berevajî û PCR-ya mîqdar di heman boriyê de hate kirin, ku operasyona ceribandinê hêsan kir û xetera gemariyê kêm kir.Di vê kîtê de, cDNA-ya yekem a cDNA bi bandor ji hêla Reverse Transcriptase-a berxwedêr ve hate sentez kirin û ji hêla HotStart Tag DNA Polymerase ve bi hêjmarî hate zêdekirin.Kit bi giranî tampon MP optimîzekirî, tevlihevkirina enzîman, hwd. Di çareseriya tamponê de jixwe Mg heye2+û dNTP.Digel vê yekê, faktorên ku dikarin bi bandor li zêdekirina PCR-ya ne-taybetî asteng bikin û karbidestiya zêdekirina reaksiyonên qPCR-ya pirjimar çêtir bikin, têne zêdekirin, ku dikare karbidestiya amplificationê misoger bike û heya reaksiyona zêdekirina piralî pêk bîne.Pergala dUTP / UDG hate zêdekirin da ku bi bandor pêşî li xetereya gemariya aerosol bigire.
Components
1. Tampon
2. Enzîm Mix
Specification
| Destpêka Germ | Destpêka germ a çêkirî |
| Metoda Detection | Vedîtina primer-sondê |
| Rêbaza PCR | Yek gav RT-qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Cureyê nimûneyê | DNA |
Şertên Storage
Hilber bi qeşa hişk tê şandin û 1 sal dikare li -25~-15℃ were hilanîn.Pêdivî ye ku ew pir caran dûr bikevecemidan-gerandin.Tête pêşniyar kirin ku ji hev veqetînin.
Instructions
1.Bersivî Sîstem
| Components | Volume (μL) | Koncentrasyona dawî |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Enzîm Mix | 1 | - |
| Miksa Primer/Sonda (2,5 μM) | 3 | 0.3 μM |
| Şablon RNA | 1-10 | - |
| RNase Belaş H2O | heta 25 | - |
Têbînî:
Berî ku bikar bînin, pê ewle bin ku baş tevlihev bikin, ji bilbilên zêde yên ku ji ber lerizîna tund çêdibin dûr bisekinin.
yek.Kêmbûna primer: Tevlihevkirina Primer tevî aşîkara multiplex, li gorî rewşê dibe ku di navbera 0.l û 1.0μM de kombûna herî baş a primer be.
b.Tevhevbûna sondajê: Tevlihevkirina sondajê tevî koma fluorescentê ya cihêrengiya nîşankirina sondaya piralî, li gorî rewşê dibe ku di navbera 0,05 û 0,5 μM de be.
c.Dilvekirina şablonê: qPCR pir hesas e û tê pêşniyar kirin ku şablon were rijandin.Nirxa Ct ya kontrolê di navbera 20 û 35 de maqûl e.
d.Amadekirina pergalê: Ji kerema xwe di tabloya xebatê ya ultra paqij, û pipettor û lûleya reaksiyonê de bêyî bermayiya nukleazê amade bikin;tê pêşniyar kirin ku serê çekê bi elementa parzûnê bikar bînin.Ji gemariya xaç û aerosolê dûr bixin.
2. Bisiklêtan OptimizedProtokol
| Zîvirok gav | Temp. | Dem | Cycles |
| Veguheztina berevajî | 50℃yek | 20 min | 1 |
| Destpêk-denaturasyon | 95℃ | 5 min | 1 |
| Reaksiyona amplification | 95℃ | 15 sec |
40-45 |
| 60℃ b | 30 sec c |
Têbînî:
yek.Veguheztina berevajî: Germahiya dikare 42°C an 50°C hilbijêre.
b.Reaksiyona zêdekirinê: Germahiya li gorî nirxa Tm ya primerên sêwirandî tê sererast kirin.
c.Bidestxistina sînyala floransê: Ji kerema xwe prosedûra ceribandinê li gorî hewcedariyên manuala amûrê bicîh bikin.
Têbînî
Ji kerema xwe PPE-ya pêwîst, wek kirasê laboratûvarê û destmalan, li xwe bikin da ku tenduristî û ewlehiya we misoger bikin.
