Enzîmên UDG/UNG
UDG (uracil DNA glycosylase) dikare hîdrolîza girêdana N-glycosidic di navbera bingeha uracil û pişta şekir-fosfatê de di ssDNA û dsDNA de katalîz bike.Ew bi hêsanî dikare qirêjiya aerosolê kontrol bike û ji bo pergalên biyolojiya molekulî ya hevpar ên wekî PCR, qPCR, RT-qPCR û LAMP maqûl e.
Specifications
| Hostê îfadeyê | E. coli recombinant bi genê DNA glycosylase uracil |
| Giraniya molekulî | 24. 8kDa |
| Paqijiya | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Heat Inactivation | 95℃, 5~10 min |
| Unit Definition | Yekîneyek (U) wekî mîqdara enzîma ku ji bo katalîzasyona hîdrolîza l μg dU-ya dsDNA di 30 hûrdeman de di 25℃ de hewce dike tê pênase kirin. |
Embarkirinî
Pêdivî ye ku hilber du salan li -25℃~-15°C were hilanîn.
Instructions
1.Amadekirina tevliheviya reaksiyona PCR li gorî pergala jêrîn
| Components | Volume (μL) | Teqandina dawî |
| 10×PCR Tampon (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol / Leach |
| Şablon DNA | X | - |
| Primer1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH2O | Heta 50 | - |
Not: Li gorî hewcedariyên ceribandinê, giraniya paşîn a dUTP dikare di navbera 0,2-0,6 mmol / L de were sererast kirin, û 0,2 mmol / L dTTP dikare bi bijartî were zêdekirin.
2.Pêvajoya amplification
| Pêngava çerxê | Germî | Dem | Cycles |
| hilweşandina şablonê dU-dihewîne | 25℃ | 10 min | 1 |
| Çalakkirina UDG, denaturasyona destpêkê ya şablonê | 95℃ | 5 ~ 10 min | 1 |
| Denaturasyon | 95℃ | 10 sec |
30-35 |
| Annealing | 60℃ | 20 sec | |
| Dirêjkirinî | 72℃ | 30 saniye/kb | |
| Berfirehkirina dawî | 72℃ | 5 min | 1 |
Not: Dema reaksiyonê li 25 ° C dikare li gorî hewcedariyên ceribandinê di nav 5-10 hûrdeman de were sererast kirin.
Têbînî
1.UDG di piraniya tamponên reaksiyona PCR de çalak e.
2.Dema ku têne bikar anîn divê enzîm di qutiya qeşayê de an jî li ser hemamek qeşayê werin hilanîn û piştî karanîna tavilê divê di -20 °C de bêne hilanîn.
3.Ji kerema xwe PPE-ya pêwîst, cil û bergên laboratîfê yên weha li xwe bikin, da ku tenduristî û ewlehiya we misoger bikin!
