Proteinase K mNGS (avî)
Proteinase K proteazek serine stabîl e ku xwedan taybetmendiya substratê ya berfireh e.Ew gelek proteînan di rewşa xwemalî de jî di hebûna deterjantan de hilweşîne.Delîlên ji lêkolînên strukturên krîstal û molekulî destnîşan dikin ku enzîm ji malbata subtilisin e ku bi sêweyek katalîtîk a cîhê çalak e (Asp39-Bûyin69-Ser224).Cihê serdest ê veqetandinê girêdana peptîdê ye ku li tenişta koma karboksîl a asîdên amînî yên alifatîk û aromatîk ên bi komên alfa-amino yên blokekirî re ye.Ew bi gelemperî ji bo taybetmendiya xwe ya berfireh tê bikar anîn.Ev proteînaza K bi taybetî ji bo mNGS hatiye çêkirin.Li gorî proteînaza K-ya din, ew bi heman performansa enzîmatîk re hê kêmtir gemariya asîda nukleîk vedihewîne, ku dikare çêtir serîlêdana mNGS-ya jêrîn misoger bike.
Şertên Storage
2-8 ℃ ji bo 2 salan
Specification
| Xuyabûnî | Şîrkek bêreng ber qehweyî ya sivik |
| Çalakî | ≥800 U/ml |
| Berhevkirina Protein | ≥20 mg/ml |
| Nickase | Yek nehat dîtin |
| DNase | Yek nehat dîtin |
| RNase | Yek nehat dîtin |
Taybetmendiyên
| hejmara EC | 3.4.21.64(Recombinant ji albûma Tritirachium) |
| Xala îsoelektrîkê | 7.81 |
| PH optimum | 7.0- 12.0 Wêne 1 |
| Germahiya optimum | 65 ℃ Wêne 2 |
| aramiya pH | pH 4,5- 12,5 (25 ℃, 16 h) Wêne 3 |
| îstîqrara termal | Li jêr 50 ℃ (pH 8.0, 30 hûrdem) Hêjmara 4 |
| îstîqrara Storage | Zêdetirî 90% çalakiyê ji bo 12 mehan li 25 ℃ |
| Activators | SDS, urea |
| Inhibitors | Diisopropyl fluorophosphate;fenîlmethylsulfonyl fluoride |
Applications
1. Kîta teşhîsa genetîkî
2. Kîtên derxistina RNA û DNA
3. Derxistina hêmanên ne-proteîn ji destan, hilweşandina nepakiyên proteîn, wek DNAderzî û amadekirina heparin
4. Amadekirina ADNya kromozomê bi elektroforezên pêlsî
5. blota rojavayî
6. Reagentên albûmîn ên glycosylated enzîmatîk di teşhîsa vitro de
Tewdîr
Dema ku hûn bikar tînin an jî giran dikin destikên parastinê û gogan li xwe bikin, û piştî bikar anînê baş bi hewa vekin.Dibe ku ev hilber bibe sedema reaksiyonên alerjîk ên çerm û aciziyek cidî ya çavan.Ger bêhin kirin, dibe ku bibe sedema alerjî an nîşanên astimê an jî dyspnea.Dibe ku bibe sedema acizbûna nefesê.
Unit pênase
Yekîneyek (U) wekî mîqdara enzîma ku ji bo hîdrolîzkirina kazeînê hewce dike ku 1 μmol hilberîne tê pênase kirin.tyrosine per minute di bin şert û mercên jêr.
Amadekirina reagents
Reagent I: 1 g kazeîna şîr di 50 ml çareseriya 0.1M sodyum fosfatê (pH 8.0) de hate hilweşandin, di 65-70 ℃ avê de ji bo 15 hûrdeman hate înkubakirin, hate helandin û hilweşandin, bi avê sar kirin, ji hêla hîdroksîdê sodyûm ve heya pH 8.0 hate sererast kirin, û hejand. 100 ml.
Reagent II: 0.1M trichloroacetic acid, 0.2M sodyum acetate, 0.3M acetic asîd.
Reagent III: 0,4M Na2CO3çare.
Reagent IV: Reagenta Forint 5 caran bi ava paqij tê rijandin.
Reagent V: Diluentê enzîmê: 0.1M çareseriya fosfatê sodyûm (pH 8.0).
Reagent VI: Çareseriya tîrosîn: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml tîrosîn bi 0,2 ve hatî hilweşandinM HCl.
Doz
1. 0,5 ml ji reagent I-yê berî 37℃ tê germ kirin, 0,5 ml çareseriya enzîmê lê zêde bike, baş tevlihev bike, û li înkubat bike.37 ℃ ji bo 10 min.
2. Ji bo ku reaksiyonê rawestîne 1 ml reagent II lê zêde bikin, baş tevlihev bikin û 30 hûrdeman inkubasyonê bidomînin.
3. Çareseriya reaksiyonê ya centrifugate.
4. 0,5 ml supernatant hildin, 2,5 ml reagent III, 0,5 ml reagent IV lê zêde bikin, baş tevlihev bikin û di 37℃ de bihelînin.ji bo 30 min.
5. OD660wekî OD hate diyarkirin1;Koma kontrolê ya vala: 0,5 ml reagent V ji bo şûna enzîmê tê bikar anînçareseriya ji bo diyarkirina OD660wek OD2, ΔOD=OD1-OD2.
6. Kûçika standard L-tîrosîn: 0.5mL çareseriya L-tîrosîn giraniya cûda, 2.5mL Reagent III, 0.5mL Reagent IV di lûleya santrîfujê ya 5mL de, di 37℃ de ji bo 30 hûrdeman inkubat bikin, ji bo OD vedîtin.660ji bo tansiyona L-tîrosîn a cihêreng, dûv re qertafa standard Y=kX+b tê bidestxistin, li wir Y giraniya L-tîrosîn e, X OD e.600.
Hesabkirînî
2: Hêjmara tevahî ya çareseriya reaksiyonê (mL)
0.5: Hêjmara çareseriya enzîmê (mL)
0.5: Hêjmara şilavê ya reaksiyonê ku di destnîşankirina kromojenîk de tê bikar anîn (mL)
10: Dema reaksiyonê (min)
Df: Dilbûna piralî
C: Giraniya enzîmê (mg/mL)
Çavkanî
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Biophys.Res.Commun.(1971);44:513.
3. Hîlz, H.et al.,Eur.J. Biochem.(1975);56:103-108.
4. Sambrook Jet al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor (1989).
Figures
Keman.1 Optimum pH
100mM çareseriya tampon: pH6.0-8.0, Na-fosfat;pH8.0-9.0, Tris-HCl;pH9,0-12,5, Glycine-NaOH.Kanbûna enzîmê:1mg/ml
Fig.2 Germahiya optimum
Reaksiyonê di 20 mM tampon K-fosfatê de pH 8.0.Giraniya enzîmê: 1 mg/ml
Fig.3 pH Nehejî
25 ℃, 16 h-dermankirina bi çareseriya tampon 50 mM: pH 4.5- 5.5, Acetate;pH 6,0-8,0, Na-fosfat;pH 8,0-9,0, Tris-HCl.pH 9,0- 12,5, Glycine-NaOH.Giraniya enzîmê: 1 mg/ml
Fig.4 Termal nehejî
30 min-dermankirina bi tampon Tris-HCl 50 mM, pH 8.0.Giraniya enzîmê: 1 mg/ml
Fig.5 Storage stability at 25℃
