Proteinase K NGS (powder)
Hejmara pisîkê: HC4507A
NGS Protease K proteazek serine stabîl e ku xwedan çalakiya enzîmê ya bilind û taybetmendiya substratê ya berfireh e. Enzîm bi bijartî girêkên ester û peptîdên li tenişta C-termînala asîdên amînî yên hîdrofobîk, asîdên amînî yên ku sulfur hene û asîdên amînî yên aromatîk veqetîne.Ji ber vê yekê, ew bi gelemperî ji bo hilweşandina proteînan di peptîdên kurt de tê bikar anîn.NGS Protease K bi Asp re proteazek serine tîpîk e39-Bûyin69-Ser224Triada katalîtîk ku ji bo proteazên serine yekta ye, û navenda katalîtîk bi tov Ca dorpêçkirî ye.2+cihên girêdanê yên ji bo stabilîzasyonê, di bin şert û mercên berfireh de çalakiya enzîmê ya bilind diparêzin.
Specification
| Xuyabûnî | Toza amorf a spî ber spî, lyophilized |
| Çalakiya taybetî | ≥40U/mg zexm |
| DNase | Yek nehat dîtin |
| RNase | Yek nehat dîtin |
| Bioburden | ≤50CFU/g hişk |
| Bermayiya asîda nukleîk | <5 pg/mg zexm |
Taybetmendiyên
| Kanî | Albuma Tritirachium |
| hejmara EC | 3.4.21.64(Recombinant ji albûma Tritirachium) |
| Giraniya molekulî | 29kDa (SDS-PAGE) |
| Xala îsoelektrîkê | 7.81 Fig.1 |
| PH optimum | 7.0-12.0 (Hemû çalakiya bilind dikin) Fig.2 |
| Germahiya optimum | 65℃ Fig.3 |
| Stability pH | pH 4,5-12,5 (25℃,16h) Wêne.4 |
| îstîqrara termal | Li jêr 50℃ (pH 8.0, 30min) Fig.5 |
| îstîqrara Storage | Li 25℃ 12 mehan tê hilanîn Fig.6 |
| Activators | SDS, urea |
| Inhibitors | Diisopropyl fluorophosphate;benzylsulfonyl floride |
Şertên Storage
Toza lyophilized li -25~-15 ℃ ji bo demek dirêj dûrî ronahiyê hilînin;Piştî hilweşandinê, ji bo hilanîna kurt-kurt li 2-8 ℃ dûrî ronahiyê an hilanîna demdirêj li -25 ~ -15 ℃ ji ronahiyê dûr veqetînin.
Tewdîr
Dema ku hûn bikar tînin an jî giran dikin destikên parastinê û gogan li xwe bikin, û piştî bikar anînê baş bi hewa vekin.Dibe ku ev hilber bibe sedema reaksiyonên alerjîk ên çerm û aciziyek cidî ya çavan.Ger bêhin kirin, dibe ku bibe sedema alerjî an nîşanên astimê an jî dyspnea.Dibe ku bibe sedema acizbûna nefesê.
Unit pênase
Yekîneyek NGS Protease K wekî mîqdara enzîma ku ji bo hîdrolîzkirina kazeînê di nav 1 μmol L-tyrosine de di bin şert û mercên destnîşankirina standard de hewce dike tê pênase kirin.
Amadekirina reagents
| Reagent | Çêker | Ketelog |
| Casein teknîkîji şîrê dewaran | Sigma Aldrich | C7078 |
| NaOH | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4·2H2O | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| Trîchloroacetic acid | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| Acetate sodyûm | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| Acetic acid | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| HCl | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| Karbonat Sodyûm | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| Foline-fenol | Sangon Biotech (Shanghai)Co., Ltd. | A500467-0100 |
| L-tîrosîn | Sigma | 93829 |
Reagent I:
Substrat: 1% Casein ji çareseriya şîrê gayan: 1 g kazeîna şîrê gayan di 50 ml 0.1M çareseriya sodyum fosfatê de, pH 8.0, di hemamek avê de di germahiya 65-70 °C de 15 hûrdeman germ bikin, tevlihev bikin û bihelînin, bi avê sar bikin, bi rê ve bibin. sodyûm hîdroksîd heya pH 8.0, û di nav 100 ml de hûr bikin.
Reagent II:
Çareseriya TCA: 0,1M asîda trichloroacetic, 0,2M acetate sodyûm û 0,3M asîdê acetîk (giraniya 1,64g asîda trîchloroacetic + 1,64g asîdê sodyûm + 1,724mL asîda acetîk li pey hev, 50mL ava deionîzekirî lê zêde bike, bi pH430 re biguhezîne. 100 ml).
Reagent III:
0,4 m çareseriya karbonat sodyûm (4,24 g karbonat sodyûmê bêhîdro bi giranî û di 100 mL avê de bihelînin)
Reagent IV:
Reagenta folîn fenol: 5 caran bi ava deionîzekirî veşêre.
Reagent V:
Diluentê enzîmê: 0,1 M çareseriya fosfatê sodyûm, pH 8,0.
Reagent VI:
Çareseriya standard a L-tîrosîn: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml L-tîrosîn bi 0,2M HCl ve hatî hilweşandin.
Doz
1. Spectrophotometer UV-Vis vekin û pîvana fotometrîk hilbijêrin.
2. Dirêjahiya pêlê wekî 660nm saz bikin.
3. Serşokê avê vekin, germahiyê li 37℃ saz bikin, germahiya 3-5 hûrdeman neguherî piştrast bikin.
4. 0.5mL substratê di lûleya santrafujê ya 2mL de li serşoka avê ya 37℃ ji bo 10 deqîqeyan berê germ bikin.
5. 0,5 mL çareseriya enzîmê ya hûrkirî ji bo 10 hûrdeman derxe nav lûleya santrîfujê ya berî germkirî.Diluentê enzîmê wekî koma vala destnîşan bikin.
6. Piştî reaksiyonê yekser 1.0 mL reagenta TCA zêde bikin.Baş tevlihev bikin û 30 hûrdeman di hemama avê de bihêlin.
7. Çareseriya berteka centrifugate.
8. Bi rêza diyarkirî pêkhateyên jêrîn lê zêde bikin.
| Reagent | Bend |
| Supernatant | 0,5 ml |
| 0,4M karbonat Sodium | 2,5 ml |
| Reagenta Folin fenol | 0,5 ml |
9. Beriya ku 30 deqeyan di germahiya 37℃ de bihelînin, baş tevlihev bikin.
10. OD660wekî OD hate diyarkirin1;Koma kontrolê ya vala: Diluenta enzîmê ji bo ku li şûna çareseriya enzîmê bigire ji bo destnîşankirina OD tê bikar anîn660wek OD2, ΔOD=OD1-OD2.
11. Kûçika standard L-tîrosîn: 0,5 mL çareseriya L-tîrosîn giraniya cûda, 2,5 mL 0,4M karbonat Sodyûm, 0,5 mL reagenta folin fenolê di lûleya santrîfujê ya 5 mL de, di 37℃ de ji bo 30 hûrdeman înkubat bikin, ji bo OD vedîtin.660ji bo hûrbûna cûda ya L-tîrosîn, paşê kêşeya standard Y=kX+b tête peyda kirin, li ku derê Y giraniya L-tîrosîn e, X OD e.600.
Hesabkirînî
2: Hêjmara tevahî ya çareseriya reaksiyonê (mL)
0.5: Hêjmara çareseriya enzîmê (mL)
0.5: Hêjmara şilavê ya reaksiyonê ku di destnîşankirina kromojenîk de tê bikar anîn (mL)
10: Dema reaksiyonê (min)
Df: Dilbûna piralî
C: Giraniya enzîmê (mg/mL)
Figures
Fig.1 Bermayiya DNA
| Mînak | Ave C4 | Asîda Nukleîk Vejandin (pg/mg) | Dîsadîtinî(%) | Total Nucleic Asîd ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | Rêsakanî bekarhênan 83% | 2.687 |
| PRK + STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| H2O bê RNA | Undetermined | - | - | - |
Fig.2 PH optimum
Fig.3 Germahiya optimum
Fig.4 Îstiqrara pH
Fig.5 aramiya termal
Fig.6 îstîqrara hilanînê li 25℃
