Rnase Inhibitor
Inhibitorê RNase ya Murine frensek RNase ya mûşîyê ya rekombînant e ku ji E.coli hatî eşkere kirin û paqij kirin.Ew bi girêdana ne-kovalentî bi rêjeyek 1:1 bi RNase A, B an C ve girêdide, bi vî rengî çalakiya sê enzîman asteng dike û RNA ji hilweşandinê diparêze.Lêbelê, ew li dijî RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H an RNase ji Aspergillus ne bandor e.Inhibitorê RNase ya Murine ji hêla RT-PCR, RT-qPCR û mRNA IVT ve hate ceribandin, û bi cûrbecûr transkriptazên Reverse yên bazirganî, DNA polymerases û RNA polymerases re hevaheng bû.
Li gorî înhîbîtorên RNase yên mirovî, frenkera RNase ya mûşî du sîsteînên ku ji oksîdasyonê re pir hesas in ku dibe sedema neçalakkirina înhîbîtorê vedihewîne.Ev dihêle ku ew di tansiyonên kêm ên DTT (kêmtir ji 1 mM) de domdar be.Ev taybetmendî wê ji bo karanîna di reaksiyonên ku tansiyonên bilind ên DTT li hember reaksiyonê nebaş e (mînak RT-PCR-a-dema rastîn) minasib dike.
Asepanê
Ev hilber dikare bi berfirehî di her ceribandinê de were bikar anîn ku têde mudaxelekirina RNase gengaz e ku ji hilweşandina RNA dûr bixe, wek:
1.Senteza rêzika yekem a cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, hwd.
2.Di dema veguheztina/wergera in vitro de RNA ji hilweşandinê diparêze (mînak, pergala vejandina vîrusê ya in vitro).
3.Astengkirina çalakiya RNase di dema veqetandin û paqijkirina RNA de.
Şertên Storage
Hilber dikare li -25 ~ 15 ℃ were hilanîn, ji bo 2 salan derbasdar e.
Storage tampon
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT û 50% glycerol.
Unit pênase
Rêjeya mêtîngerê RNase ya mûşê ku ji bo astengkirina çalakiya 5ng rîbonukleaza A ji sedî 50% hewce dike wekî yekîneyek (U) hate destnîşankirin.
Giraniya molekulê ya proteînê
Giraniya molekulê ya înhîbîtorê RNase ya mûşî 50 kDa ye.
Kontrola kalîteyê
Exonuclease Çalakî:
40 U înhîbîtorê RNase ya mûşê bi 1 μg λ -Hind III ADNyê di 37℃ 16 saetan de diherike, wekî ku ji hêla elektroforez gêla agarose ve hatî destnîşan kirin tu hilweşînek dernakeve.
Çalakiya Endonuclease:
40 U înhîbîtorê RNase ya mûşî bi 1μg λ DNA li 37℃ ji bo 16 demjimêran, wekî ku ji hêla elektroforez gêla agarose ve hatî destnîşankirin, hilweşînek dernakeve.
Nicking Çalakî:
40U înhîbîtorê RNase ya mûşê bi 1μg pBR322 li 37℃ ji bo 16 demjimêran, wekî ku ji hêla elektroforeziya gel agarosê ve hatî destnîşankirin, hilweşînek dernakeve.
RNase Çalakî:
40U înhîbîtorê RNase ya mûşî bi 1.6μg MS2 RNA ji bo 4h di 37℃ de, wekî ku ji hêla elektroforez gêla agarose ve hatî destnîşankirin, hilweşînek dernakeve.
E.coli DNA:
40 U ya frenkera RNase ya mûşê ji bo hebûna DNAya genomîk a E. coli bi karanîna TaqMan qPCR bi primerên taybetî yên ji bo cîhê E. coli 16S rRNA tê ceribandin.Têkçûna DNA ya genomîkî ya E. coli ≤ 0,1 pg/40 U ye.
Notes
1.Lihevhatina tundûtûjî an hejandin dê bibe sedema neçalakkirina enzîmê.
2. Rêjeya germahiya optimum a vê astengkerê 25-55 ℃ bû, û ew li 65 ℃ û jor de neçalak bû.
3. Çalakiyên RNase H, RNase 1 û RNase T1 ji hêla astengkerê RNase ya mûşî ve nehatin asteng kirin.
4. Astengkirina çalakiya RNase di navberek berfireh a pH de hate dîtin (pH 5-9 hemî çalak bûn), û çalakiya herî bilind di pH 7-8 de hate dîtin.
5. Ji ber ku rîbonukleaz bi gelemperî di bin şert û mercên denaturasyonê de çalakiya xwe diparêzin, divê bal were kişandin ku molekulên RNase Inhibitor ên ku bi rîbonukleazê re tevlihev bûne nehêlin.Ji bo pêşîlêgirtina serbestberdana rîbonukleaza çalak, divê ji germahiyên ji 50 °C mezintir û tansiyonên bilind ên urea an jî madeyên din ên denaturker dûr bikevin.
