Kit Mini Derxistina DNA
Ev kît pergala tamponê ya xweşbînkirî û teknolojiya paqijkirina stûna silica gel digire, ku dikare perçeyên DNA yên 70 bp - 20 kb ji hûrgelên cihêreng ên TAE an TBE agarose gel vegerîne.Stûna adsorbasyona ADN-ê dikare bi taybetî di bin şerta xwê ya zêde de ADN-ê bişoxilîne.Wekî din, kît dikare rasterast perçeyên DNA ji hilberên PCR, pergalên reaksiyona enzîmatîk an hilberên DNA yên xav ên ku bi awayên din hatine wergirtin paqij bike, û nepaqijiyên wekî proteîn, pêkhateyên organîk ên din, îyonên xwê yên neorganîk û primerên oligonukleotidê jê bike.Ew dikare piştrast bike ku paqijkirin dikare di nav 10-15 hûrdeman de were qedandin.ADN-ya paqijkirî dikare rasterast ji bo lîgasyon, veguheztin, vejandina enzîmê, veguheztina in vitro, PCR, rêzkirin, mîkroînjeksiyonê, hwd were bikar anîn.
Şertên hilanînê
Li -15 ~ -25 ℃ hilînin û li germahiya odeyê hilînin.
Components
| Components | (100 rxns) |
| Tampon GDP | 80 ml |
| Tampon GW | 2 × 20 ml |
| Elution Buffer | 20 ml |
| FastPure DNA Mini Columns-G | 100 |
GDP tampon:Tampon girêdana ADNyê.
Buffer GW:Tampon şuştinê;Berî ku bikar bînin, etanolek bêkêmasî bi hêjeya diyarkirî li ser şûşeyê zêde bikin.
Elution Buffer:Elution.
FastPure DNA Mini Columns-G:Stûnên adsorption DNA.
Tubeyên berhevkirinê 2 ml:tubes Collection ji bo filtrate.
Materyalên Amadekirî
1,5 ml lûleyên sterilîzekirî, etanol mutleq û îsopropanol (dema parçeya DNA ≤100 bp, 1 cild lê zêde bike
îsopropanol heya 1 volgê gel), serşoka avê.
Pêvajoya Ceribandinê
80 ml etanolê lê zêde bikin ku Buffer GW-ê wekî ku li ser etîketê hatî destnîşan kirin berî bikar bînin, li germahiya odeyê hilînin.
Mekanîk
1. Çareseriya reaksiyona PCR
Plana derxistina gel: Pîlana vegerandina çareseriya reaksiyonê ya PCR ya Buffer GDP-ê bi qebarek wekhev zêde bikin:Zêdekirina 5 caran volume Buffer
2. GDP Bihejmêre qebareya gel(100 μl 100 mg e)
Gel hilweşînin
3. Di 50-55 de berî germ bikin℃
4. Bind Wash
300 μL Buffer GDP zêde bikin*
700 μL Buffer GW zêde bikin
700 μL Buffer GW zêde bikin
5. Elute
20 - 30 μL Elution Buffer an ava deionized zêde bikin
Nîşe * Vegerandina şilava reaksiyona PCR bêyî vê gavê
Bernameya derxistina gel
1. Piştî elektroforezkirina ADNyê ji bo perçekirina perçeyên ADNyê, yek xêza perçeya ADNyê ji gêla agarozê di bin ronahiya UV de derxînin.Tête pêşniyar kirin ku hûn kaxezek vegirtinê bikar bînin da ku şilahiya xuya ya gêlê bişoxilînin û bi qasî ku hûn dikarin agaroseya zêde jê bikin, mezinahiya parça gel kêm bikin.Parça gêlê (bê lûleya mîkrosentrîfujê) bipîvin da ku qebareya wê bihesibînin: Qebareya 100 mg gêlê bi qasî 100 μL ye, bi şertê ku tîrêjî 1g/ml be.
2. GDP-ya Bufferê ya yeksan lê zêde bikin, 7-10 hûrdem li 50~55℃ înkubat bikin (li gorî mezinahiya gel, dema înkubasyonê rast bikin heya ku gel bi tevahî belav bibe).Di dema înkubasyonê de boriyê 2 caran bizivirînin.
Δ Zêdekirina 1-3 cildên Buffer GDP dê bandorê li kargêriya vegerandina DNA neke.Ger perçeya DNA ya ku divê were vegerandin <100 bp, pêdivî ye ku 3 cildên Buffer GDP werin zêdekirin;gava ku parça gêlê bi tevahî hilweşe, 1 cild îsopropanol lê zêde bikin û bi tevahî tevlihev bikin, dûv re gavê din bidomînin.
3. Bi kurtî santrîfuj bikin da ku nimûneyê bigihînin binê boriyê, FastPure DNA Mini Columns-G têxin nav lûleyên berhevkirinê yên 2 ml, bi baldarî çareserî herî zêde 700 μL carekê carekê veguhezînin.
dema stûnên parzûnê, 30-60 saniyeyan di 12,000 rpm (13,800 X g) de santrîfuj bikin.
4. Parzûnê biavêjin û 300 μL Buffer GDP li stûnê zêde bikin, 1 hûrdem li germahiya odeyê bihêlin, 12,000 rpm (13,800 X g) 30-60 saniyeyê santrîfuj bikin.
5. Parzûnê biavêjin û 700 μL Buffer GW (kontrol bikin ka etanolê mutleq ji berê ve hatiye zêdekirin!) li stûnê zêde bikin, bi 12,000 rpm (13,800 X g) 30-60 saniyeyê santrîfuj bikin.
Δ Ji kerema xwe Buffer GW li dora dîwarê stûna adsorbasyonê lê zêde bikin, an berga paşîn a Buffer GW lê zêde bikin û 2 - 3 caran serûbin bikin da ku bibin alîkar ku xwêya ku bi dîwarê boriyê ve girêdayî ye bi tevahî bişon.
6. Pêngava 5 dubare bikin.
Δ şûştina bi Buffer GW du caran dikare piştrast bike ku xwê bi tevahî were rakirin û bandora ceribandinên paşîn ji holê rake.
7. Parzûnê biavêjin û stûna vala bi 12,000 rpm (13,800 X g) 2 deqeyan santrîfuj bikin.
8. Stûnê têxin nav lûleya mîkrosentrîfujê ya paqij a 1,5 ml, 20 - 30 μL Elution Buffer li navenda parzûna stûnê zêde bikin, 2 hûrdeman înkuba bikin, û dûv re 1 hûrdem bi 12,000 rpm (13,800 X g) santrîfuj bikin.Stûnê biavêjin, ADNya ku hatî bidestxistin di -20 de hilînin.
Δ Veguheztina supernatantê gava 8-ê li stûnê ji bo ku ji nû ve bişewitîne û pêş-germkirina Tampona Elutionê heya 55 (gava perçeya DNA> 3 kb) dibe ku ji bo zêdekirina karîgeriya vejenê bibe alîkar.
Bernameya hilanîna hilberên PCR
Ev protokol ji bo paqijkirina perçeyên DNA ji hilberên PCR, pergala reaksiyona enzîmatîk û hilberên din ên xav ên DNA (di nav de DNA ya genetîkî) tê sepandin.Ev çareserî dikare nucleotîdên cûrbecûr, primers, dimerên primerê, molekulên xwê, enzîm û nepaqijiyên din bi bandor jê bike.
1. Bi kurtî hilberên PCR, çareseriya reaksiyona enzîmatîk, û hilberên din ên xav ên DNA-yê santrîfuj bikin.Hêjmara wan bi pipetê binirxînin û veguherînin boriyek sterilîzekirî ya 1,5 ml an 2 ml.ddH2O zêde bikin heya ku volta 100 μL;dema ku ji bo ADN-ya genomîkî ya bi konsantresyona bilind, 300 μL bi ddH2O re rijandin dê bibe alîkar ku kargêriya vejenê baştir bike.
2. 5 cildên Buffer GDP zêde bikin, bi berevajîkirin an dorpêçkirinê bi tevahî tevlihev bikin.Ger perçeya DNA ya balkêş> 100 bp, pêdivî ye ku 1,5 cildên din (nimûne + GDP tampon) etanolê were zêdekirin.
3. Stûnê dîsa têxin lûleya berhevkirinê, mixtrue veguherînin stûnê, santrîfujê bikin 12,000 rpm (13,800 ×g) ji bo 30 - 60 sec.Ger qebareya çareseriya têkel ji 700 µL be, stûna adsorbasyonê dîsa têxin lûleya berhevkirinê, çareya mayî vediguhezînin stûna adsorbasyonê, û di 12,000 rpm (13,800 × g) de ji bo 30 - 60 çirkeyan santrîfuj bikin.
4. Performansa paşîn behsa qonaxa 5 – 8 ya 08- 1/Gel bernameya derxistinê dike.
Applications
Girêdanên cihêreng ên TAE an TBE agarose gel;Berhemên PCR, pergalên reaksiyona enzîmatîk an hilberên din ên DNA yên xav ên ku bi awayên cihêreng têne wergirtin.Parçeyên hatine bidestxistin ji rêzê ne70 bp -20 kb.
Têbînî
Tenê ji bo lêkolînê bikar bînin.Ne ji bo karanîna di prosedurên tespîtkirinê de ye.
1. 80 ml etanolê lê zêde bikin ku Buffer GW-ya ku li ser etîketê hatî destnîşan kirin berî ku were bikar anîn were rijandin, li germahiya odeyê hilînin.
2. Ger GDP-ya Buffer hêsan e ku di dema hilanîna germahiya nizm de bibare, ew dikare ji bo demek berî karanîna li germahiya odeyê were danîn.Ger hewce be, ew dikare di hemamek avê ya 37 ℃ de were germ kirin heya ku tîrêj bi tevahî hilweşe, û dûv re ew dikare piştî tevlihevkirinê were bikar anîn.
3. Germahiya serşokê ya avê li pêş 50 ~ 55℃ saz bikin.
4. Di bernameya derxistina 08-1/Gel 1-ê de, kêmkirina mezinahiya parça gêlê dê bi girîngî dema hilweşandinê kêm bike û karbidestiya vejînê zêde bike (DNAya xêzkirî dema ku bi domdarî di germahiya bilind de tê xuyang kirin bi hêsanî hîdrolîze dibe).Ji bo demek dirêj gêlê DNA nedin ber UV, ji ber ku ronahiya ultraviolet dikare zirarê bide DNA.
5. Di bernameya derxistina 08-1/Gel 2-ê de gêlê bi tevahî hilweşînin, wekî din bandora vegerandina DNA dê bi giranî bandor bibe.
6. Bergermkirina Elution Buffer an ddH2O heya 55℃, ku ji bo baştirkirina kargêriya elusyona DNA-yê alîkar e.Tê pêşniyar kirin ku DNA di eluenta 2,5 mM Tris-HCl, pH 7,0 - 8,5 de were hilanîn.
