Robustart Taq DNA Polymerase
Robustart Taq DNA Polymerase DNA-polymerase ya destpêka germ e.Ev hilber ne tenê çêtir dikare reaksiyona ne-taybetî ya ku ji hêla ne-taybetî ya pîvaz an kombûna primer ve di pêvajoya amadekirina pergala PCR-ê û zêdekirinê de çêdibe asteng bike.Ji ber vê yekê, ew xwedan taybetmendiyek hêja ye û ji bo zêdekirina şablonên hûrgelê yên kêm bi bandortir e, û ew ji bo reaksiyona zêdekirina PCR-ya multiplexed maqûl e.Digel vê yekê, ev hilber xwedan sepandinek pir baş e, û encamên bihêzkirina stabîl dikare di cûrbecûr reaksiyonên PCR de were bidestxistin.
Components
1.5 U/μL Robustart Taq DNA polymerase
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ belaş) (vebijarkî)
3.25 mM MgCl2(bixwe)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ belaş) dNTP û Mg²+ nîne, ji kerema xwe dNTP û MgCl zêde bikin2dema amadekirina pergala reaksiyonê.
Serlêdanên Pêşniyar kirin
1.Amplification Fast.
2.Amplification Multiple.
3.Zêdekirina rasterast a xwînê, swabs, û nimûneyên din.
4.Tespîtkirina nexweşiyên respirasyonê.
Rewşa Storage
-20°C ji bo depokirina demdirêj, divê berî ku were bikar anîn baş were tevlihev kirin, ji cemidandin-germbûna pir caran dûr bisekinin.
*Eger piştî sarincê baran bibare, normal e;Pêşniyar kirin ku berî tevlihevkirin û karanîna germahiya odeyê hevseng bikin.
Unit Definition
Yekîneyek çalak (U) wekî mîqdara enzîmê tê pênase kirin ku 10 nmol deoksîrîbonukleotîd di nav maddeya ku di asîd-bêçareserî de di 74°C de ji bo 30 hûrdeman vedihewîne bi karanîna DNA-ya spermê salmonê aktîfkirî wekî şablon/primer tê pênase kirin.
Kontrola Kalîteyê
1.Paqijiya elektroforetîkî ya SDS-PAGE ji% 98 mezintir e.
2.Hestiyariya zêdekirinê, kontrolkirina hevîrê, aramî.
3.Çalakiya nukleazê ya eksogenous tune, endonuclease ya exogenous an tevliheviya exonuclease tune
Instructions
Setup Reaksiyonê
| Components | Volume (μL) | Koncentrasyona dawî |
| 10 × PCR Buffer II (Mg²+ belaş)a | 5 | 1× |
| dNTP (10mM her dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robustart Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
| 25 × Miksa Primerb | 2 | 1× |
| Şablon | - | ＜ 1 μg/reaksiyon |
| ddH2O | Heta 50 | - |
Têbînî:
1) a.Tampon dNTP û Mg²+ nîne, ji kerema xwe dNTP û MgCl lê zêde bikin2dema amadekirina pergala reaksiyonê.
2) b.Ger ji bo qPCR/qRT-PCR were bikar anîn, divê sondayên fluorescent li pergala reaksiyonê werin zêdekirin.Bi gelemperî, giraniya paşîn a paşîn a 0.2 μM dê encamên baş bide;heke performansa reaksiyonê nebaş be, hûrbûna primer dikare di navbera 0,2-1 μM de were sererast kirin.Pîvana sondajê bi gelemperî di navbera 0.1-0.3 μM de xweşbîn e.Ezmûnên gradientê yên konsantasyonê dikarin bêne kirin da ku hevrêziya çêtirîn a primer û sondajê bibînin.
Protokola bisiklêdana termal
| PCR bi rêkûpêkdoz | |||
| Gav | Germî | Dem | Cycles |
| Pre-denaturation | 95℃ | 1-5 min | 1 |
| Denaturasyon | 95℃ | 10-20 saniye | 40-50 |
| Pîvankirin / Extension | 56-64℃ | 20-60 sec | |
| Fast PCRdoz | |||
| Gav | Germî | Dem | Cycles |
| Pre-denaturation | 95℃ | 30 sec | 1 |
| Denaturasyon | 95℃ | 1-5 sec | 40-45 |
| Pîvankirin / Extension | 56-64℃ | 5-20 saniye | |
Têbînî
1.Rêjeya zêdekirina DNA polymerase ya bilez divê ji 1 kb/10 s kêmtir nebe.Rêjeya bilindbûn û daketina germahiyê, moda kontrolkirina germahiyê û karbidestiya rêgirtina germê ya amûrên cihêreng ên PCR pir diguhezin, ji ber vê yekê tê pêşniyar kirin ku şertên reaksiyonê yên çêtirîn ji bo amûra PCR-ya bilez a taybetî xweş bikin.
2.Pergal pir adapteyî ye, bi taybetmendî û hesasiyeta bilindtir e.
3.Ji bo karanîna wekî reagentên tespîtkirina PCR-ya bi hesasiyeta bilind maqûl e, û dikare di reaksiyonên zêdekirina PCR-ya multiplex de were bikar anîn.
4.5'→3' çalakiya polymerase, 5'→3' çalakiya exonuclease;no 3'→5' çalakiya exonuclease;fonksiyona rastnivîsandinê tune.
5.Ji bo ceribandina kalîteyî û hejmarî ya PCR û RT-PCR maqûl e.
6.Dawiya 3' ya hilbera PCR A ye, ku rasterast dikare di vektorek T de were klon kirin.
7.Rêbaza sê-gavekî ji bo primerên bi germahiyên pijandinê yên kêm an jî ji bo zêdekirina perçeyên ji 200 bp dirêjtir tê pêşniyar kirin.
