Mouse Genotyping Kit

Hejmara pisîkê: HCR2021A

Ev hilber kîteyek e ku ji bo nasîna bilez a genotipên mişkê hatî çêkirin, di nav de derxistina xav a DNA û pergala zêdekirina PCR.Hilber dikare ji bo zêdekirina PCR rasterast ji dûvê mişk, guh, tilikê û tevnên din ên piştî perçebûna hêsan ji hêla Lysis Buffer û Proteinase k ve were bikar anîn.Di şevekê de nexwarin, derxistina fenol-kloroform an paqijkirina stûnê tune, ku hêsan e û dema ceribandinan kurt dike.Hilber ji bo zêdekirina perçeyên armancê heya 2kb û reaksiyonên PCR-ya multiplex bi heya 3 cot primera re maqûl e.2×Mouse Tissue Direct PCR Mix dihewîne DNA polymerase, Mg ku bi endezyariya genetîkî ve hatî çêkirin.²⁺, dNTP û pergalek tamponê ya xweşbînkirî da ku karbidestiya zêdekirina zêde û tolerasyona astengker peyda bike, ji ber vê yekê reaksiyonên PCR-ê bi lêkirina şablon û primeran û ji nû ve rijandina hilberê di 1× de bêne kirin.Hilbera PCR ya ku bi vê hilberê ve hatî zêdekirin di dawiya 3' de bingehek "A" ya berbiçav heye û piştî paqijkirinê rasterast ji bo klonkirina TA dikare were bikar anîn.

Components

Şertên Storage

Divê hilber 2 salan li -25~-15℃ bêne hilanîn.Piştî şilbûnê, Lysis Buffer dikare ji bo karanîna pir-kurt-kurt di 2 ~ 8 ℃ de were hilanîn, û dema ku bikar bîne baş tevlihev bike.

Bikaranînî

Ev hilber ji bo analîza kêşana mişk, tespîtkirina transgenîk, genotyping û hwd maqûl e.

Features

1.Operasyona hêsan: ne hewce ye ku DNA-ya genomîk derxe;

2.Serlêdana berfireh: ji bo zêdekirina rasterast a tevnên cûrbecûr yên mişkê maqûl e.

Instructions

1.Derxistina DNA ya genomîk

1) Amadekirina lysate

Lîzata tevnvîsê li gorî hejmara nimûneyên mişkê yên ku têne lîzkirin tê amadekirin (lîzata tevnvîsê divê li cîh li gorî dozê were amadekirin û ji bo karanîna bi tevahî were tevlihev kirin), û rêjeya reagentên ku ji bo nimûneyek yekane hewce ne wiha ye:

2) Amadekirina Sample û Lysis

Bikaranîna Tissue Pêşniyar kirin

Mîqdarek guncav ji nimûneyên tevna mişkê di lûleyên santrîfujê yên paqij de bavêjin, 200 μL lîzata tevna nû li her lûleya santrîfujê zêde bikin, bizivirînin û bihejînin, dûv re li 55℃ ji bo 30 hûrdeman înkuba bikin, û dûv re li 98℃ 3 hûrdeman germ bikin.

3) Centrîfugasyon

Lîzatê baş bihejînin û 5 hûrdeman di 12,000 rpm de santrîfuj bikin.Supernatant dikare wekî şablonê ji bo zêdekirina PCR were bikar anîn.Ger şablon ji bo hilanînê hewce be, supernatant veguhezînin lûleyek din a santrîfujê ya sterîl û 2 hefte li -20℃ hilînin.

2.PCR Amplification

2×Mouse Tissue Direct PCR Mix ji -20℃ rakin û li ser cemedê bihelînin, serûbin bikin û li gorî tabloya jêrîn pergala berteka PCR amade bikin (li ser cemedê bixebitin):

Not:

a) Divê mîqdara lê zêdekirî ji 1/10 ya pergalê derbas nebe, û heke pir zêde were zêdekirin, dibe ku zêdekirina PCR were asteng kirin.

Mercên PCR yên Pêşniyarkirî

Not:

a) Germahiya lêdanê: Bi referansa li ser nirxa Tm ya primerê, tê pêşniyar kirin ku germahiya lêdanê li ser nirxa Tm ya piçûktir +3~5℃ were danîn.

Pirsgirêk û Çareseriyên Hevbeş

1.No strip hedef

1) Berhema lîzê ya zêde.Mîqdara herî maqûl ya şablonê hilbijêrin, bi gelemperî ji 1/10 pergalê ne zêdetir;

2) Mezinahiya nimûneya pir mezin.Lîzatê 10 caran hûr bikin û dûv re zêde bikin, an jî mezinahiya nimûneyê kêm bikin û ji nû ve lîz bikin;

3) Nimûneyên tîrêjê ne teze ne.Tê pêşniyar kirin ku nimûneyên tevna nû bikar bînin;

4) Qalîteya pêşîn a xirab.Ji bo zêdekirina ADN-ya genomîk bikar bînin da ku qalîteya primerê verast bikin û sêwirana primer xweş bikin.

2.Amplification non-taybet

1) Germahiya lêdanê pir kêm e û hejmara çerxê pir zêde ye.Germahiya annealkirinê zêde bikin û hejmara dewreyan kêm bikin;

2) Kêmkirina şablonê pir zêde ye.Piştî zêdekirinê mîqdara şablonê kêm bikin an şablonê 10 caran hûr bikin;

3) Taybetmendiya pêşîn a xirab.Sêwirana primerê xweşbîn bikin.

Têbînî

1.Ji bo ku di navbera nimûneyan de gemarî nebe, divê gelek amûrên nimûneyê werin amadekirin, û rûyê amûran dikare piştî her nimûneyê bi çareseriya hîpoklorît a sodyûmê 2% an jî paqijkera asîda nukleîk were paqij kirin, heke dubare bikar anîn.

2.Tête pêşniyar kirin ku tevnên mişkê yên nû bikar bînin, û hêjmara nimûneyê divê pir mezin nebe da ku bandorê li encamên zêdekirinê neke.

3.Lysis Buffer pêdivî ye ku pir caran ji cemidan-germkirinê dûr bikeve, û ji bo karanîna pir-kurt-kurt dikare di 2~8℃ de were hilanîn.Ger di germahiya nizm de were hilanîn, dibe ku barîn çêbibe, û divê berî karanîna bi tevahî were hilweşandin.

4.PCR Mix divê pir caran ji cemidan-germkirinê dûr bisekine, û ji bo karanîna dubare ya kurt-kurt dikare di 4℃ de were hilanîn.

5.Ev hilber tenê ji bo lêkolîna ezmûnî ya zanistî ye û divê di teşhîs an dermankirina klînîkî de neyê bikar anîn.