M-MLV Reverse Transcriptase
RevScript Reverse transkriptase ji hêla teknolojiya endezyariya genetîkî ve tê wergirtin.Ew xwedan şiyana senteza cDNA, aramiya termal û sînorê germahiya reaksiyonê (heta 60 ° C) heye.Berhema cDNA ya sentezkirî heya 10 kb e.Ew hevahengiya şablonan zêde dike û ji bo veguheztina berevajî ya şablonên RNA yên bi strukturên navîn ên tevlihev an genên kopiya kêm re maqûl e.
Components
| Perçe | HC2003B-01 (10,000 U) | HC2003B-02 (5*10,000 U) | HC2003B-03 (200,000 U) |
| RevScript Reverse Transcriptase (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 ml |
| 5 × RevScript Buffer | 250 μL | 1,25 ml | 5 ml |
Rewşa Storage
Divê ev hilber 2 salan li -25°C~-15°C were hilanîn.
Unit Definition
Yekîneyek 1 nmol dTTP di nav 10 hûrdeman de di 37°C de di 37°C de 1 nmol dTTP dixe nav maddeya ku di asîdê de nayê çareser kirin bi karanîna Oligo(dT) wekî destpêk.
Setup Reaksiyonê
1.Denaturasyona şablonê RNA (Ev gav vebijarkî ye, denaturasyona şablonê RNA ji vekirina strukturên duyemîn re dibe alîkar, ku dê hilberîna cDNA-ya risteya yekem baştir bike.)
| Components | Volume (μL) |
| RNase belaş ddH2O | Heta 13 |
| Olîgo(dT)18 (50 μmol/L) an Destpêka Random (50 μmol/L) An Primerên Taybet ên Genê (2 μmol / L) | 1 |
| an 1 | |
| an 1 | |
| şablonê RNA | Xa |
Têbînî:
1) a: ARN ya tevayî: 1-5 ug an jî mRNA: 1-500 ng
2) Di 65°C de 5 hûrdeman înkub kirin, dûv re tavilê li ser qeşayê 2 hûrdeman sar kirin.Sentrîfujasyonek kurt ji bo berhevkirina şilava reaksiyonê, çareseriya reaksiyona veguheztina berevajî ya ku di tabloya jêrîn de tê xuyang kirin lê zêde bikin.Bi nermî bi pipetê vekin ku tevlihev bikin.
1.Amadekirina tevliheviya reaksiyonê (20 μL volume)
| Components | Volume (μL) |
| Tevliheviya gava berê | 13 |
| 5× Tampon | 4 |
| dNTP Mix (10nmol/L) | 1 |
| Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 |
| Inhibîtorê RNase (40 U/μL) | 1 |
1.Reaksiyonê di bin şert û mercên jêrîn de pêk bînin:
| Germahiya (°C) | Dem |
| 25 °Ca | 5 min |
| 42 °Cb | 15-30 min |
| 85 °Cc | 5 min |
Têbînî:
1) a.Inkubasyon li 25°C ji bo 5 deqîqeyan tenê ji bo karanîna hexamerên bêserûber hewce ye.Ji kerema xwe dema ku Oligo (dT) bikar tînin vê gavê berdin18an Gene Specific Primer.
2) b.Germahiya veguheztina berevajî ya pêşniyarkirî 42 ° C ye, Ji bo şablonên bi strukturên navîn ên tevlihev an naveroka GC-ya bilind, tê pêşniyar kirin ku germahiya reaksiyonê ji 50-55 °C bilind bikin.
3) c.Germkirina li 85°C ji bo 5 deqîqeyan da ku transkriptaza berevajî neçalak bike.
4) Hilber dikare rasterast di reaksiyonên PCR an qPCR de were bikar anîn, an jî ji bo hilanîna demek kurt li -20 °C were hilanîn.Ji bo hilanîna dirêj-dirêj tê pêşniyar kirin ku hilberan aligu bikin û li -80 ° C hilînin.Gelek caran ji cemidan-germkirinê dûr bisekinin.
5) Hilber ji bo RT-qPCR yek-gavekî maqûl e, tê pêşniyar kirin ku ji bo her pergala reaksiyonê ya 25μL 10-20 U transkrîptaza berevajî lê zêde bike, an jî li gorî rewşa rastîn hêjmara transkriptaza berevajî zêde bike.
Têbînî
1.Ji kerema xwe qada ceribandinê paqij bihêlin;Di dema operasyonê de divê destikên paqij û maskeyên paqij werin hilanîn.Pêdivî ye ku hemî malzemeyên ku di ceribandinê de têne bikar anîn bêyî RNase bin da ku pêşî li tevlihevbûna RNase bigire.
2.Hemû prosedur divê li ser qeşayê bêne kirin da ku pêşî li hilweşandina ARNyê were girtin.
3.Nimûneyên RNA-ya kalîteya bilind têne pêşniyar kirin ku ji bo berevajîkirina berevajî berevajî karbidestiya bilind peyda bikin.
4.Ev hilber tenê ji bo karanîna lêkolînê ye.
5.Ji kerema xwe, ji bo ewlehiya we, bi kincên laboratûwar û destmalên yekcar kar bikin.
