prou
Products
M-MLV Neoscript Reverse Transcriptase HC2004A Wêneyê Taybetmendî
  • M-MLV Neoscript Reverse Transcriptase HC2004A

M-MLV Neoscript Reverse Transcriptase


Hejmara pisîkê: HC2004A

Pakêt:0.1ml/1ml/5ml

Neoscript Reverse Transcriptase transkrîptazek berevajî ye ku bi vekolîna mutasyonê ya gena M-MLV ya virusa leukemiya mûşî ya Moloney û îfadeya li E.coli ve hatî wergirtin.

Danasîna hilberê

hûrguliya hilberê

Neoscript Reverse Transcriptase transkrîptazek berevajî ye ku bi vekolîna mutasyonê ya gena M-MLV ya virusa leukemiya mûşî ya Moloney û îfadeya li E.coli ve hatî wergirtin.Enzîm çalakiya RNase H ji holê radike, xwedan tolerasyona germahiyê ye, û ji bo veguheztina berevajî ya germahiya bilind maqûl e.Ji ber vê yekê, ew ji bo rakirina bandorên nebaş ên avahiya-asta bilind a RNA û faktorên ne-taybet ên li ser senteza cDNA arîkar e, û xwedan îstîqrara bilind û şiyana senteza veguheztina berevajî ye.Enzîm xwedan îstîqrara bilind û şiyana senteza veguheztina berevajî ye.


  • Pêşî:
  • Piştî:

  • Components

    1.200 U/μL Neoscript Reverse Transcriptase

    2.5 × Tampona Yekem-Strand (vebijarkî)

    * 5 × Bufera Pêşîn-Strand dNTP nagire, ji kerema xwe dema ku pergala reaksiyonê amade dikin dNTP-an lê zêde bikin

     

    Serlêdana Pêşniyar kirin

    1.QRT-PCR yek gav.

    2.Tespîtkirina vîrusa RNA.

     

    Rewşa Storage

    -20°C ji bo depokirina demdirêj, divê berî ku were bikar anîn baş were tevlihev kirin, ji cemidandin-germbûna pir caran dûr bisekinin.

     

    Unit Definition

    Yekîneyek 1 nmol dTTP di 10 hûrdeman de li 37°C bi karanîna poly(A)•oligo(dT) vedihewîne25wek şablon/primer.

     

    Kontrola Kalîteyê

    1.Paqijiya elektroforetîkî ya SDS-PAGE ji% 98 mezintir e.

    2.Hestiyariya zêdekirinê, kontrolkirina hevîrê, aramî.

    3.Çalakiya nukleazê ya eksogenous tune, endonuclease ya exogenous an tevliheviya exonuclease tune

     

    Sazkirina Reaksiyonê ji bo Çareseriya Reaksiyona Zincîra Yekem

    1.Amadekirina tevlîheviya reaksiyonê

    Components

    Bend

    Olîgo(dT)12-18 Primer

    an Random Primeryek

    An Gene Specific Primersb

    50 pmol

    50 pmol (20-100 pmol)

    2 pmol

    10 mM dNTP

    1 μL

    Şablon RNA

    Tevahiya RNA≤ 5μg;mRNA≤ 1 μg

    dH bê RNase2O

    Heta 10 μL

    Têbînî:a/b: Ji kerema xwe li gorî hewcedariyên xwe yên ceribandî cureyên cuda yên primers hilbijêrin.

    2.5 deqeyan di 65°C de germ bikin û 2 deqeyan li ser cemedê zû sar bikin.

    3.Hêmanên jêrîn li pergala jorîn bi tevahî 20 μL zêde bikin û bi nermî tevlihev bikin:

    Components

    Volume (μL)

    5 × Yekem-Strand Buffer

    4

    Neoscript Reverse Transcriptase (200 U/μL)

    1

    Inhibîtorê RNase (40 U/μL)

    1

    dH bê RNase2O

    Heta 20 μL

    4.Ji ​​kerema xwe reaksiyonê li gorî şert û mercên jêrîn pêk bînin:

    (1) Ger Random Primer were bikar anîn, divê reaksiyonê li 25℃ ji bo 10 hûrdeman, û dûv re li 50℃ ji bo 30 ~ 60 hûrdeman were kirin;

    (2) Ger Oligo dT an primerên taybetî têne bikar anîn, divê reaksîyon li 50 ℃ ji bo 30 ~ 60 hûrdeman were kirin.

    5.Li 95℃ 5 hûrdeman germ bikin da ku Neoscript Reverse Transcriptase neçalak bike û reaksiyonê biqedîne.

    6.Berhemên veguheztina berevajî dikare rasterast di reaksiyona PCR û reaksiyona PCR-ya mîqdar a fluorescence de were bikar anîn, an ji bo demek dirêj li -20℃ were hilanîn.

     

    PCR Reaction:

    1.Amadekirina tevlîheviya reaksiyonê

    Components

    Lisersekinî

    10 × PCR Buffer (dNTP belaş, Mg²+ belaş)

    dNTP (10mM her dNTP)

    200 μM

    25 mM MgCl2

    1-4 mM

    Taq DNA Polymerase (5U/μL)

    2-2,5 U

    Primer 1 (10 μM)

    0,2-1 μM

    Primer 2 (10 μM)

    0,2-1 μM

    Şablonyek

    ≤10% Çareseriya Reaksiyona Zincîra Yekem (2 μL)

    ddH2O

    Heta 50 μL

    Têbînî:a: Heke pir zêde çareseriya reaksiyona zincîra yekem were zêdekirin, dibe ku reaksiyona PCR were asteng kirin.

    2.Pêvajoya Reaksiyonê ya PCR

    Gav

    Germî

    Dem

    Cycles

    Pre-denaturation

    95℃

    2-5 min

    1

    Denaturasyon

    95℃

    10-20 saniye

    30-40

    Annealing

    50-60℃

    10-30 saniye

    Dirêjkirinî

    72℃

    10-60 sec

     

    Têbînî

    1.Ji bo xweşbîniya germahiya veguheztina berevajî ya di navbera 42℃~55℃ de maqûl e.

    2.Ew xwedan îstîqrara çêtir e, ji bo zêdekirina veguheztina berevajî ya germahiya bilind maqûl e.Digel vê yekê, ew ji bo derbasbûna bi bandor di nav deverên pêkhatî yên tevlihev ên RNA de guncan e.Her weha, ewji bo tespîtkirina RT-PCR-ya mîqdar a fluoresansê ya yek-gavekî minasib e.

    3.Bi cûrbecûr enzîmên zêdekirina PCR-ê re lihevhatinek baş e û ji bo reaksiyonên RT-PCR bi hestiyariya bilind re maqûl e.

    4.Minasib ji bo reaksiyona RT-PCR ya mîqdar a yek-gavekî ya fluorescence ya bi hesasiya bilind, bi bandor rêjeya tespîtkirina hûrbûna kêm a şablonan çêtir dike.

    5.Ji bo avakirina pirtûkxaneya cDNA maqûl e.

     

    Peyama xwe li vir binivîse û ji me re bişîne