2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Hejmara pisîkê: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) hatiye dîzaynkirin ku PCR rasterast ji nimûneyan bêyî derxistina DNA an amadekirina nimûneyê pêk bîne.Ev reagent ji DNA polymerase ya germ-destpêk, glycosylase DNA ya uracil (UNG), RNase Inhibitor, MgCl pêk tê.2, dNTP (bi dUTP li şûna dTTP), û stabîlîzker, ji bo PCR-ya mîqdar (qPCR).Vê reagentê tolerasyona înhîbîtor a bilind çêdike, û ji ber vê yekê ew dikare rasterast ji bo tespîtkirina nimûneyên mîna şûşeya qirikê, saliva, xwîna tevahî ya dijî-koagulated, plazma û serum bê derxistina DNA were sepandin.Reagent tamponek xwedan ji bo qPCR bi enzîmên tevlihev ên DNA-polîmeraza dijî-bergirker û enzîma UNG bikar tîne.Ji ber vê yekê, ew dikare di nimûneyên ku înhibîtor hene de zêdebûnek baş a genên armanc werbigire û zêdekirina erênî ya derewîn a ku ji ber qirêjiya mayî û aerosolê ya PCR-yê pêk tê asteng bike.Ev reagent bi piraniya amûrên PCR-ya mîqdar ên fluorescent re, wekî Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche û hwd re hevaheng e.
Components
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Şertên hilanînê
Pêdivî ye ku hemî pêkhate ji bo hilanîna demdirêj -20 ℃ û heya 3 mehan di 4 ℃ de bêne girtin.Ji kerema xwe piştî şilbûnê bi tevahî tevlihev bikin û berî ku bikar bînin santrîfuj bikin.Gelek caran ji cemidan-germkirinê dûr bisekinin.
Protokola Bisîkletê
| Gav | Germî | Dem | Zîvirok |
| Hezm | 50℃ | 2min | 1 |
| Çalakkirina Polymerase | 95℃ | 1-5 min | 1 |
| Denature | 95℃ | 10-20s | 40-50 |
| Pîvankirin / Extension | 56-64℃ | 20-60 |
Talîmatên Pipetting
| Reagent | Volume per bersivî | Volume per reaksiyonê | Koncentrasyona dawî |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12,5 μL | 25 μL | 1× |
| 50×Enzîma SensiDirect/UNG Têkel | 0,5 μL | 1µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix1, 2 | 1µL | 2 μL | 1× |
| Mînak3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Bi tevahî volume | 25 μL | 50 μL | - |
1. Giraniya dawîn a primer bi gelemperî 0.2μM e.Ji bo encamên çêtir, berhevoka primer dikare di nav rêza 0.2-1μM de were xweş kirin.
2. Bi gelemperî, hûrbûna sondajê dikare di nav rêza 0.1-0.3μM de xweşbîn bibe.Kêmbûna herî baş a sondayê bi amûra zêdekirina PCR-ya dema rast, celebê sondajê, û celebê maddeya nîşankirina fluorescent ve girêdayî ye.Ji kerema xwe serî li manuala amûrê an hewcedariyên taybetî yên her sondajê fluorescent bidin.
3. Cûreyên cuda yên nimûneyan cureyên cuda û naveroka înhibitor û hejmara kopî ya genê hedef dihewîne.Pêdivî ye ku hêjeya nimûneyê li gorî rewşa rastîn were hesibandin.Ger hewce be, bi lê zêdekirina ava bê nukleaz an TE Tamponek nimûneyê çêkin.
4. Hêjmara pêşniyarên nimûneyên cûda:
| Mînak | Volume ji bo yek 50 μL bersivî | Zêdetir têkilî |
| Xwîna tevahî antîkoagulated | 2,5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Serum | 10 μL | 20% |
| Swab qirikê | 10 μL | 20% |
| Xwezî | 10 μL | 20% |
Kontrola Kalîteyê
1. Vedîtina fonksiyonê: hestiyar, taybetmendî û dubarebûna qPCR.
2. Çalakiya nukleazê ya biyanî tune: endonuclease û qirêjiya exonuclease tune.
Têbiniyên Hilberê
1. Ev hilber celebek nû ya DNA-ya polîmerazê ya germ-destpêk bikar tîne, ku dikare di nav 1-5 hûrdeman de were aktîf kirin. Ji ber ku tampona reaksiyonê ya wê xweştir bûye, ew ji bo PCR-ya hejmarî ya fluorescence ya ducarî an pirjimar bi karanîna rêbaza lêpirsînê guncantir e.
2. Ger nirxa Rn ya zêdekirina PCR-ê pir kêm be an zêdebûn bi eşkere were asteng kirin, kêmkirina mîqdara nimûneyê, zêdekirina qebareya reaksiyonê an hejandina berê ya nimûneyê dibe ku encam baştir bike.
3. Divê berhevkirina xwîn, saliva, mîz, şûşa qirikê, hwd.. Divê pîvanên pîvanên klînîkî bişopînin, û nimûneya nû dikare were bikar anîn da ku pêşî li hilweşandina asîda nukleîk bigire.
4. Ji ber ku amplikonên cihêreng ji dUTP-ê û hesasiya UNG-ê re karbidestiya karanîna cûda ne, ger dema ku pergala UNG bikar tînin hesasiyeta tespîtê kêm bibe divê reagent bêne xweş kirin.Ger hewce be ji kerema xwe ji bo piştgiriya teknîkî bi me re têkilî daynin.
5. Ji bo ku di navbera reaksiyonên yek-gavekî de ji zêdekirina hilberên PCR-ê yên guhezbar dûr nekevin, ji bo zêdekirinê qada ceribandinê ya taybetî û pipet hewce ne.Bi destmalan bixebitin û pir caran biguherînin û piştî zêdekirina PCR lûleya reaksiyonê venekin.
