PNGase F
Peptide-N-Glycosidase F (PNGase F) rêbaza enzîmatîk a herî bi bandor e ku hema hema hemî oligosakarîdên bi N-girêdayî ji glycoproteins derxistin.PNGase F amîdazek e, ku di navbera herî GlcNAc û asparagîna bermahiyên hundurîn ên manoza bilind, hîbrîd û oligosakarîdên tevlihev ên ji glycoproteînên bi N-girêdayî de diqete.
Bikaranînî
Ev enzîm ji bo rakirina bermahiyên karbohîdartan ji proteînan bikêr e.
Amadekirin û taybetmendî
| Xuyabûnî | Şîva bêreng |
| Paqijiya proteîn | ≥95% (ji SDS-PAGE) |
| Çalakî | ≥500,000 U/ml |
| Exoglycosidase | Ti çalakî nehat dîtin (ND) |
| Endoglycosidase F1 | ND |
| Endoglycosidase F2 | ND |
| Endoglycosidase F3 | ND |
| Endoglycosidase H | ND |
| Protease | ND |
Taybetmendiyên
| hejmara EC | 3.5.1.52(Recombinant ji mîkroorganîzmê) |
| Giraniya molekulî | 35 kDa (SDS-PAGE) |
| Xala îsoelektrîkê | 8. 14 |
| PH optimum | 7.0-8.0 |
| Germahiya optimum | 65 °C |
| Taybetmendiya substratê | Di navbera bermayiyên GlcNAc û asparagine de qutkirina girêdanên glycosidic Fig.1 |
| Malperên naskirina | Glîkanên bi N-girêdayî heya ku α1-3 fucose nebin Xiflteya 2 |
| Activators | DTT |
| Inhibitor | SDS |
| Germahiya hilanînê | -25 ~ -15 ℃ |
| Heat Inactivation | Tevliheviyek reaksiyonê ya 20 μL ya ku 1 μL PNGase F tê de heye bi inkubasyonê li 75 °C ji bo 10 hûrdeman tê neaktîf kirin. |
Wêne 1 Taybetmendiya substratê ya PNGase F
Fig. 2 Naskirina PNGase F.
Dema ku bermahiyên GlcNAc yên navxweyî bi α1-3 fucozê ve têne girêdan, PNGase F nikare oligosakarîdên N-girêdayî ji glycoproteins veqetîne.Ev guhertin di nebatan û hin glycoproteînên kêzikan de hevpar e.
Cpêkhateyên
|
| Components | Lisersekinî |
| 1 | PNGase F | 50 µl |
| 2 | 10×Glycoprotein Denaturing Buffer | 1000 μl |
| 3 | 10×GlycoBuffer 2 | 1000 μl |
| 4 | 10% NP-40 | 1000 μl |
Unit pênase
Yekîneyek (U) wekî mîqdara enzîmê tê pênase kirin ku ji %95% karbohîdratê ji 10 μg RNase B ya denaturedkirî di 1 saetê de li 37°C di navberek reaksiyonê ya tevahî 10 μL de jêbirin.
Şertên reaksiyonê
1. 1-20 μg glycoprotein bi ava deionîzekirî de bihelînin, 1 μl 10×Glycoprotein Denaturing Buffer û H2O (eger pêwîst be) lê zêde bikin da ku 10 μl volga reaksiyonê ya tevayî çêbikin.
2.10 deqeyan di 100°C de bihelînin, li ser qeşayê sar bikin.
3.2 μl 10×GlycoBuffer 2, 2 μl 10% NP-40 lê zêde bikin û tevlihev bikin.
4.1-2 μl PNGase F û H zêde bikin2O (heke hewce bike) 20 µl volga reaksiyonê ya tevayî çêkin û tevlihev bikin.
5.Reaksiyonê li 37 ° C ji bo 60 deqîqeyan vekin.
6.Ji bo analîza SDS-PAGE an analîza HPLC.
