DNase I
DNase I (Deoksîrîbonukleaz I) endodeoksîrîbonukleazek e ku dikare ADN-ya yek an jî dubendî bişewitîne.Ew girêdanên fosfodîesterê nas dike û diqetîne ku monodeoksînukleotîd an oligodeoxynukleotîdên yek- an du-bendî bi komên fosfatê li 5'-termînalê û hîdroksîl li 3'-termînalê hilberîne.Çalakiya DNase I bi Ca2+ ve girêdayî ye û dikare ji hêla îyonên metal ên duvalent ên wekî Mn2+ û Zn2+ ve were çalak kirin.5mM Ca2+ enzîmê ji hîdrolîzê diparêze.Di hebûna Mg2+ de, enzîm dikaribû bi korfelaqî her cîhek li ser her zincîra ADNyê nas bike û bişkîne.Di hebûna Mn2+ de, zincîrên ducarî yên ADNyê bi hevdemî dikarin werin nas kirin û hema hema li heman cîhê werin qut kirin da ku perçeyên DNA yên dawiya paşîn an perçeyên DNA yên dawiya asê yên bi 1-2 nukleotîdên derketine çêbibin.
Taybetmendiya hilberê
Bovine Pankreas DNase I di pergala vegotina hevîrtirşkê de hate diyar kirin û paqij kirin.
Cpêkhateyên
| Perçe | Bend | |||
| 0.1 KU | 1KU | 5KU | 50 KU | |
| DNase I, bê RNase | 20 μL | 200 μL | 1mL | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1mL | 1mL | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Veguhastin û Storage
1. Stability Storage: - 15℃~-25℃ ji bo hilanînê;
2.Transport Stability: Veguhastina di bin pakêtên qeşayê de;
3. Supplied in: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl250% glycerol, pH 7.6 li 25℃.
Unit Definition
Yekînek wekî mîqdara enzîmê tê pênase kirin ku dê 1 μg DNAya pBR322 di 10 hûrdeman de di 37°C de bi tevahî hilweşîne.
Kontrola Kalîteyê
RNase:5U DNase I bi 1,6 μg MS2 RNA ji bo 4 demjimêran di 37 ℃ de, wekî ku bi elektroforez gêla agarose ve hatî destnîşankirin, hilweşînek dernakeve.
Bakterî Endotoksîn:Testa LAL, li gorî çapa Pharmacopoeia IV 2020 ya Chineseînî, rêbaza ceribandina sînorê gel, qaîdeya gelemperî (1143).Divê naveroka endotoksîna bakterî ≤10 EU/mg be.
Talîmatên ji bo Bikaranîna
1. Di lûleya bê-RNase de çareseriya reaksiyonê li gorî nîsbetên li jêr hatine rêz kirin amade bikin:
| Perçe | Bend |
| ARN | X μg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNase I, bê RNase (5U/μL) | 1 U her μg RNA |
| ddH2O | Heta 10 μL |
2,37 ℃ ji bo 15 deqîqeyan;
3. Tampona bidawîbûnê zêde bikin da ku reaksiyonê rawestîne, û li 65℃ 10 hûrdeman germ bikin da ku DNase I neçalak bike. Nimûne dikare rasterast ji bo ceribandina transkrîpsiyona din were bikar anîn.
Têbînî
1.Ji bo her μg RNA 1U DNase I, an jî ji 1 μg ARNyê kêmtir 1U DNase I bikar bînin.
2.EDTA divê bi giraniya dawî ya 5 mM were zêdekirin da ku RNA di dema neçalakkirina enzîmê de ji hilweşandinê biparêze.
