Kit CHO HCP ELISA
Di vê ceribandinê de rêbazek ELISA ya immunosorbent yek-gavekî tê bikar anîn.Nimûneyên ku CHOK1 HCP hene hevdem bi antî-CHOK1 bizinê nîşankirî ya HRP û antî-CHOK1 antî-CHOK1-ê ku li ser plakaya ELISA hatî pêçan re reaksiyonê dikin, di dawiyê de kompleksek sandwîç a antîbody-HCP-pêla antî-pêla qayîm-HCP-ê nîşankirî ava dikin.Antîjen-antîbodya negirêdayî dikare bi şuştina plakaya ELISA were rakirin.Substrata TMB ji bo berteka têr li bîrê tê zêdekirin.Pêşveçûna rengan piştî lê zêdekirina çareseriya rawestanê tê sekinandin, û OD an nirxa vegirtinê ya çareseriya reaksiyonê li 450/650nm bi xwendevanek mîkroplate tê xwendin.Nirxa OD an nirxa vegirtinê bi naveroka HCP-ê ya di çareseriyê de têkildar e.Ji vê yekê, hûrbûna HCP-ê di çareseriyê de dikare li gorî pîvana standard were hesibandin.
Bikaranînî
Ev kît ji bo tespîtkirina hejmarî ya bermahiyên proteîna hucreya mêvandarê CHOK1 di nimûneyan de tê bikar anîn.
Cpêkhateyên
| S/N | Perçe | Lisersekinî | Şertên Storage |
| 1 | CHOK1 HCP Standard | 0,5 mg/ml | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃, ji ronahiyê biparêzin |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, ji ronahiyê biparêzin |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Çareseriyê rawestînin | NA | RT |
| 6 | Sealers Microplate | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Plateyên pêş-vekêşana adsorbasyona bilind | NA | 2-8℃ |
Amûrên Pêdivî ye
| Vexwarin / Amûr | Çêkirin | Ketelog |
| Microplate xwendevan | Amûrên Molecular | Spectra Max M5, M5e, an wekhev |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, an jî hevwate |
| Mikserê Vortex | IKA | MS3 dîjîtal, an jî wekhev |
Storage û aramî
1.Veguhastina li -25~-15°C.
2.Şert û mercên hilanînê wek ku di tabloya 1-ê de tê nîşandan;pêkhateyên 1-2 ≤-20°C têne hilanîn, 5-6 têne hilanîn RT, 3,4, 7, 8 di 2-8℃ de têne hilanîn;dema derbasbûnê 12 meh e.
Parametreyên hilberê
1.Hestiyarî: 1ng/mL
2.Rêjeya tespîtkirinê: 3- 100ng/mL
3.Rastbûn: CV ≤ 10% întra-assay, CV ≤ 15%
4.Vegirtina HCP: > 80%
5.Taybetî: Ev kît gerdûnî ye ji ber ku ew bi taybetî bi CHOK1 HCP re serbixwe ji pêvajoya paqijkirinê re reaksiyon dike.
Amadekirina reagentê
1.PBST 0,05%
15 ml 20 × PBST 0,05%, di ddH de tê rijandin2O, û heya 300 ml hatî çêkirin.
2.1.0% BSA
1g BSA ji şûşeyê derxînin û di 100 ml PBST 0,05% de hûr bikin, baş tevlihev bikin heya ku bi tevahî belav bibe û li 2-8 °C hilînin.Tampon helandinê ya amadekirî 7 rojan derbasdar e.Tête pêşniyar kirin ku li gorî hewcedariyê amade bikin.
3.Çareseriya tespîtkirinê 2μg/mL
48 μL ji 0,5 mg/ml Anti-CHO HCP-HRP bistînin û di 11,952 μL 1% BSA de hûr bikin da ku giraniya paşîn a çareseriya tespîtkirina 2 μg/mL bistînin.
4.QC û Amadekirina Standardên CHOK1 HCP
| Lûle Na. | Eslî | Lisersekinî | Bend | 1% BSA | Tevahiya Volume | Dawî |
| A | Rêzan | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tablo: Amadekirina QC û Standardan
Pêvajoya Assay
1.Reagentên wekî ku li jor di "Amadekirina Reagentê" de hatî destnîşan kirin amade bikin.
2.50 μL ji standard, nimûne û QCs (binihêrin Tablo 3) li her bîrekê bavêjin, dûv re 100 μL çareseriya Detection (2μg/mL) lê zêde bikin;Plateya bi sealer veşêrin, û plakaya ELISA li ser termomîkkerê bixin.Di 500 rpm, 25±3 ℃ 2 saetan de înkube bikin.
3.Mîkroplateyê di lavaboyê de bizivirînin û çareseriya nixumandinê bavêjin.300 μL PBST 0,05% di her bîrekê de birijînin da ku plakaya ELISA bişon û çareserî bavêjin, û şuştinê 3 caran dubare bikin.Plateyê li ser destmalek kaxezek paqij bizivirînin û hişk bikin.
4.100 μL substratê TMB (li Tablo 1 binêre) li her bîrekê zêde bikin, plakaya ELISA-yê mor bikin, û di tariyê de li 25±3℃ 15 hûrdeman bihêlin.
5.Di her bîrekê de 100 μL çareseriya rawestandinê bi pîpet bike.
6.Di dirêjahiya pêla 450/650nm de bi xwendevana mîkroplate vegirtinê bipîvin.
7.Daneyên bi SoftMax an nermalava wekhev ve analîz bikin.Bi karanîna modela regresyonê ya lojîstîkî ya çar-parametre xêza standard xêz bikin.
Mînak Curve Standard
BİXWÎNE: Heke hûrbûna HCP-ê ya di nimûneyê de ji sînorê jorîn ê kêşeya standardê derbas dibe, berî ceribandinê pêdivî ye ku ew bi rêkûpêk bi tamponê dilopkirinê were rijandin.
NOTES
Çareseriya rawestandinê 2M asîda sulfurîk e, ji kerema xwe bi baldarî tevbigerin da ku ji rijandinê dûr nekevin!
