BspQI
BspQI dikare di E. coli de ku dikare deverên taybetî nas bike û di bin de têne hilberandin bi rengek vejenerî were diyar kirin.
BspQI, endonukleazek sînordarkirina endonukleaza sînorkirî ya IIs, ji çelekek E. coli ya rekombînant a ku gena BspQI ya klonkirî û guhertî ya ji Bacillus sphaericus hildigire, tê.Ew dikare malperên taybetî nas bike, û rêza naskirinê û malperên veqetandinê wiha ne:
5' · · · · GCTCTTC(N) · · · · · · ·
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Taybetmendiyên Hilberê
1. Çalakiya bilind, Fast digestion;
2. Çalakiya stêrkek kêm, misogerkirina qutkirina rast wekî "scalpel";
3. Bê BSA û bê eslê heywanan;
Hestiyariya Methylation
Dmetîlasyon im:Not Sensitive;
Dmethylation cm:Not Sensitive;
CpG Methylation:Not Sensitive;
Şertên hilanînê
Pêdivî ye ku hilber ≤ 0℃ were şandin;Di şerta -25~- 15℃ de hilînin.
Storage tampon
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 μg/ml Albûmîna Rekombînant, 0. 1% Trition X-100 û 50% glycerol (pH 7.0 @ 25°C).
Unit Definition
Yekîneyek wekî mîqdara enzîma ku ji bo helandina 1 μg DNA ya kontrola navxweyî di 1 saetê de li 50°C di navberek reaksiyonê ya tevahî 50 μL de hewce dike tê pênase kirin.
Kontrola Kalîteyê
Lêkolîna Paqijiya Proteînê (SDS-PAGE):Paqijiya BspQI ji hêla analîza SDS-PAGE ve ≥95% hate destnîşankirin.
RNase:10U BspQI bi 1.6μg MS2 RNA ji bo 4 demjimêran di 50℃ de, wekî ku ji hêla elektroforeziya gel agarose ve hatî destnîşan kirin, hilweşînek dernakeve.
Çalakiya DNase ya ne-taybet:10U BspQI bi 1μg λ DNA li 50℃ ji bo 16 demjimêran, li gorî 50℃ ji bo 1 demjimêran, ADN-ya zêde wekî ku ji hêla elektroforeziya gel agarose ve hatî destnîşankirin dernakeve.
Ligasyon û veqetandin:Piştî digestina 1 μg λDNA bi 10U BspQI, perçeyên DNA dikarin bi T4 DNA ligase di 16ºC de werin girêdan.Û ev perçeyên lîgakirî dikarin bi BspQI-ê ji nû ve werin qut kirin.
E. coli DNA: E. coli 16s rDNA-taybetî TaqMan vedîtina qPCR nîşan da ku bermayiya genoma E.coli ≤ 0,1 pg/ul.
Bermayiya proteîna mêvandar:≤ 50 ppm
Bakterî Endotoksîn: Testa LAL, li gorî çapa Pharmacopoeia IV 2020 ya Chineseînî, rêbaza ceribandina sînorê gel, qaîdeya gelemperî (1143).Divê naveroka endotoksîna bakterî ≤10 EU/mg be.
Pergal û şertên reaksiyonê
Perçe | Bend |
BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
DNA | 1 μg |
10 x BspQ ez Tampon | 5 μL |
dd H2O | Heta 50 μL |
Şertên reaksiyonê: 50℃, 1~ 16 saet.
Neçalakkirina germê: 80 ° C ji bo 20 hûrdeman.
Pergal û şertên reaksiyonê yên pêşniyarkirî dikarin bandorek birêkûpêkkirina enzîmê ya nisbeten baş peyda bikin, ku tenê ji bo referansê ye, ji kerema xwe ji bo hûrguliyan li encamên ceribandinê binihêrin.
serîlêdana hilberê
Restriction digestion endonuklease, Klonkirina bilez.
Têbînî
1. Qebareya enzîmê ≤ 1/10 ya qebareya reaksiyonê ye.
2. Çalakiya stêrk dibe ku dema ku asta glycerol ji 5% zêdetir be dibe.
3. Çalakiya perçebûnê dibe ku gava Substrate li jêr rêjeya pêşniyarkirî be.